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적절한 folding을 위한 chaperone team

Chaperone Plasmid Set

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
3340
Chaperone Plasmid Set
관련학술 구매하기
1 Kit
390,000원  3340_e.v2012Da.pdf



*본 제품군을 이용해 생산한 재조합 단백질을 상업적으로 활용하고자 하는 경우, 다카라코리아 고객지원센터 (02-2081-2510)로 별도 문의바랍니다.

제품설명
대장균에서 재조합단백질을 발현시키는 경우, 발현된 단백질이 inclusion body를 형성하거나 protease에 의해 분해되는 경우가 빈번하게 발생한다. 이는 발현된 단백질이 정확하게 folding 되지 않았을 때 나타나는 것으로 단백질의 기능 연구에 큰 걸림돌이 되고 있다. Chaperone을 이용하면 단백질의 정확한 folding 효율을 높일 수 있어, in vitro에서 단백질 folding 기작을 규명하기 위한 많은 연구에 활용되고 있다.
본 Chaperone Plasmid Set는 서로 다른 5종의 plasmid로 구성되어 있고, 각 plasmid는 최적의 단백질 발현 및 folding을 가능하게 하고 단백질의 misfolding을 줄이기 위해 chaperone team 으로 함께 기능하는 여러 종의 chaperone 분자가 발현하도록 설계되어 있다.
각 plasmid는 pACYC 복제 기점 (ori)과 chloramphenicol 저항성 유전자 (Cmr)를 가지고 있어 ampicillin 저항성을 부여하는 ColE1 계통의 plasmid를 포함하는 대장균 발현시스템과 함께 사용할 수 있다. 하지만, Cmr 유전자를 포함한 plasmid, chloramphenicol에 내성을 가지는 대장균 숙주와는 이용할 수 없다. 예를 들어 pET시스템 등에서 이용되는 E. coli BL21 (DE3)는 숙주로 사용할 수 있지만, Cmr 유전자가 포함된 pLysS 또는 pLysE plasmid와 pACYC 복제기점을 모두 가지는 E. coli BL21(DE3) pLysS 와는 함께 사용할 수 없다.
목적 단백질과 chaperone 분자의 co-expression을 위해서는 chaperone plasmid로 형질전환한 대장균을 제작하고, 그 후 목적단백질 발현을 위한 plasmid를 형질전환하는 2단계 방법을 추천한다. 따라서 chaperone plasmid로 형질전환한 대장균으로부터 competent cell을 조제하는 것이 필요하며, Chaperone Competent Cell BL21 시리즈를 이용하여 이 과정을 생략할 수도 있다.
구성

1.

Plasmid pG-KJE8 (10 ng/㎕)

100 ㎕

2.

Plasmid pGro7 (10 ng/㎕)

100 ㎕

3.

Plasmid pKJE7 (10 ng/㎕)

100 ㎕

4.

Plasmid pGTf2 (10 ng/㎕)

100 ㎕

5.

Plasmid pTf16 (10 ng/㎕)

100 ㎕

보존 - 20 ℃
Chaperone plasmids map

No.

Plasmid

Chaperone

Promoter

Inducer

Resistant Marker

Sequence*

1

pG-KJE8

dnaK-dnaJ-grpE
groES-groEL

araB
Pzt-1

L-Arabinose Tetracyclin

Cm

link

2

pGro7

groES-groEL

araB

L-Arabinose

Cm

link

3

pKJE7

dnaK-dnaJ-grpE

araB

L-Arabinose

Cm

link

4

pG-Tf2

groES-groEL-tig

Pzt-1

Tetracyclin

Cm

link

5

pTf16

tig

araB

L-Arabinose

Cm

link

*2020년 12월 sequence 정보가 수정되었습니다.

<이용할 수 있는 발현용 플라스미드>
본 제품에 포함된 Chaperone plasmid는 pACYC의 복제 기점 및 chloramphenicol 내성 유전자 (Cmr 유전자)을 포함하고 있어, 가장 많이 사용되는 ColE1 타입의 ampicillin 내성 유전자를 포함한 발현용 plasmid 시스템에 적용할 수 있다. 각 Chaperone 유전자는 araB 또는 Pzt-1 (tet) promoter 하류에 배치되어 있어, 목적 유전자를 lac 등 다른 promoter 하류에 두면 목적단백질과 chaperone 단백질을 따로 발현시킬 수 있고, 각 promoter에 필요한 컴포넌트 (araC 또는 tetR)은 plasmid 상에 배치되어 있다.
단, chloramphenicol 내성 유전자를 포함한 발현 plasmid 와는 함께 사용할 수 없다.
본 제품은 특히 Cold shock expression vector인 pCold™ DNA 시리즈 (Code 3360-3364), pCold™ TF DNA (Code 3365), pCold™ ProS2 DNA (Code 3371), pCold™ GST DNA (Code 3372)와 같이 사용하면 목적 단백질을 높은 효율로 발현시킬 수 있다.
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Keyword :

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