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다당류 함유샘플 전처리시약

Fruit-mate™ for RNA Purification

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	9192	Fruit-mate™ for RNA Purification	100 ml	106,400원 ~~133,000원~~	09.01 ~ 10.30

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파쇄된 식물 조직에 첨가한 후 원심분리를 통해 불순물 제거
다당류가 많은 식물 샘플에 전처리용으로 사용하여 total RNA 추출 효율 개선

제품설명

Fruit-mate™ for RNA Purification는 고구마, 과실, 종자 등의 다당류와 폴리페놀류를 다량 함유한 식물에서 RNAiso Plus (Code 9108 외)를 이용하여 total RNA를 추출할 때 함께 사용하는 RNA 추출 보조시약이다. 비이온성의 폴리머를 사용해 다당류와 폴리페놀류를 제거하여, 일반적인 RNA 추출 Kit만으로는 추출이 어려운 식물에서 효과적으로 RNA를 추출할 수 있다.

RNAiso Plus (Code 9108 외)와 함께 사용하는 경우, 파쇄한 샘플에 본 제품을 넣고 잘 섞어준 뒤 원심분리를 통해 불순물을 제거할 수 있다. 이후 RNAiso Plus (Code 9108 외)의 제품 매뉴얼에 따라 RNA를 추출한다.

이 제품을 사용시, 아래의 샘플에서 total RNA의 회수율이 높아지는 것을 확인하였다.
- 방울토마토 (과실), 바나나 (과육), 토마토 (종자), 쌀 (종자), 감자 (근경), 귤 (껍질), 소나무 (잎), 알로에 (잎), 망고 (과실), 애기장대 (종자)

[주의] 이 제품은 다당류나 폴리페놀이 많은 식물 샘플 전용으로 개발되었으므로 식물 (조직)에 따라 RNA의 회수율이 개선되지 않거나 오히려 저하되는 경우가 있다. 상기 이외의 식물 (조직)에 적용하는 경우, 혹은 다당류의 함유량이 높지 않은 식물 (조직)에 적용하는 경우 RNA 추출 효율이 개선되지 않을 수 있다.

보존

- 실온
- 이 제품은 20℃ 이하에서 보존하는 경우 침전이 발생할 수 있다. 이 경우, 37℃에서 침전물을 용해한 후 사용한다.

본 제품 이외에 필요한 시약

- RNAiso Plus (Code 9108 외)
- Chloroform
- Isopropanol
- 75% 에탄올
- RNase-free water or TE Buffer

적용 예 - 다양한 식물 조직의 전처리 효과 (RNAiso Plus와의 조합)

A. 실험방법
1. 100 ㎎ 이상의 식물 조직을 막자사발에 넣고 액체 질소를 첨가하여 파쇄한다.
2. 파쇄한 식물 조직 100 ㎎을 액체 질소로 얼려둔 1.5 ㎖ RNase-free tube에 넣어 Fruit-mate 시약 1 ㎖을 첨가하고 후 잘 섞어 5분간 4℃, 12,000×g에서 원심분리 한다. 이후 상등액을 2개의 1.5 ㎖ RNase-free tube에 같은 분량 씩 나누어 옮긴다.
3. 각 튜브에 0.5 ㎖의 RNAiso Plus (Fruit-mate와 동량)을 첨가한 후, 실온에서 5분간 방치한다.
4. 0.2 ㎖의 Chloroform을 첨가한 후 실온에서 5분간 방치하고, 15분간 4℃, 12,000×g로 원심분리 한다. 이후 붉은 하층의 유기 용매층, 중간층, 무색의 상층으로 나뉘면 RNA가 상층으로 분리된다.
5. 중간층에 닿지 않도록 주의해서 상층을 새로운 튜브에 옮긴다.
6. 회수한 상층과 같은 양의 Isopropanol을 첨가하여 실온에서 10분 방치한다. 이후 10분간 4℃, 12,000×g로 원심분리하면 RNA가 튜브바닥에 가라앉는다.
7. 상층액을 버리고 RNA pellet을 1 ㎖의 75% 에탄올로 1회 washing 한 후, 5분간 4℃, 7,500×g로 원심분리한다.
8. 상층액을 제거한 후 남은 Pellet을 실온에서 건조 후 적정량의 RNase-free water에 녹인다.
주의) RNA의 용해가 어려워질 수 있으니 원심분리나 가열을 통해 건조하지 않는다.

B. 결과
아래의 식물 조직에서 상기 방법으로 Fruit-mate를 처리한 경우와 처리하지 않은 경우의 total RNA 추출 효과를 비교하였다. Fruit-mate를 처리하지 않았을 때는 total RNA가 잘 추출되지 않았던 샘플에 Fruit-mate를 처리하는 것으로 total RNA가 추출되는 것을 확인하였다 (그림 1).

그림 1. Fruit-mate 처리(+)/무 처리(-)후에 RNAiso Plus로 추출한 total RNA의 전기 영동 결과

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Keyword : RNA 추출,RNA추출,RNA purification

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