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다당류 및 폴리페놀류를 다량 함유하고 있는 식물의 total RNA 추출을 위한 전처리 시약

다당류 함유샘플 전처리 시약

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	9192	Fruit-mate™ for RNA Purification	100 ml	120,000원

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상세정보

본 제품은 다당류나 폴리페놀류 등을 다량 포함하는 식물샘플 (감자, 과실, 종자 등)에서 RNAiso Plus (Code 9108/9109)를 이용하여 total RNA를 추출할 때 함께 사용하는 RNA 추출 보조시약이다.

다당류 (Polysaccharides)나 폴리페놀류 (polyphenols)와 결합하는 성질을 가진 비이온성 폴리머 (non-ionic polymer)를 이용하는 원리로, 파쇄한 실험재료에 본 제품을 첨가하여 원심분리 하면 다당류나 폴리페놀류를 간단히 제거할 수 있다. 따라서, RNA 추출 키트만으로는 어려웠던 식물샘플에서 효과적으로 RNA를 추출할 수 있다.

RNAiso Plus (Code 9108/9109)와 함께 사용할 경우, 파쇄한 실험재료에 본 제품을 첨가하여 혼합한 후 원심분리에 의해 불용물을 제거한 다음 RNAiso Plus 제품매뉴얼에 따라 RNA를 추출한다.

본 제품으로 total RNA 회수율이 높아지는 효과를 확인한 식물(조직)은 아래와 같다.

효과적인 식물(부위)
방울토마토(과실), 바나나(과육), 딸기(과육), 토마토(종자), 쌀(종자), 감자(근경), 귤(껍질), 소나무(잎), 알로에(잎), 망고(과실), 애기장대(종자)

【주의】 본 제품은 특히 다당류나 폴리페놀류가 많은 식물 전용으로 개발되었으므로 식물 (조직)에 따라 RNA 회수율이 개선되지 않거나 오히려 회수율이 저하되는 경우가 있습니다. 상기 이외의 식물 (조직)에 적용하는 경우, 혹은 다당류 함유량이 높지 않은 샘플에서는 효과가 나타나지 않을 수도 있습니다.

보존 실온

20℃ 이하로 보관하면 침전이 생길 수 있습니다. 침전이 생겼을 경우 37℃ 에서 침전물을 완전히 용해한 후, 사용해 주십시오.

Application - 다양한 식물 조직의 전처리 효과 (RNAiso Plus와의 조합)

1. 방법
1. 100 ㎎ 이상의 식물 조직을 막자사발에 넣고 액체 질소를 첨가하여 파쇄한다.
2. 파쇄한 식물 조직 100 ㎎을 액체 질소로 얼려둔 1.5 ㎖ RNase-free tube에 넣어 Fruit-mate 시약 1 ㎖을 첨가한 후 잘 섞어, 4℃, 12,000×g 에서 5분간 원심분리 한다. 상등액을 2개의 1.5 ㎖ RNase-free tube에 같은 분량씩 나누어 옮긴다.
3. 각 튜브에 0.5 ㎖의 RNAiso Plus (Fruit-mate와 동량)을 첨가한 후, 실온에서 5분간 방치한다.
4. 0.2 ㎖의 클로로포름을 첨가한 후 실온에서 5분간 방치한다. 4℃, 12,000×g 에서 15분간 원심분리 한다. 원심 후 붉은 하층의 유기 용매층, 중간층, 무색의 상층으로 나뉘며 RNA는 상층에 포함된다.
5. 중간층에 닿지 않도록 주의해서 상층을 새로운 튜브에 옮긴다.
6. 회수한 상층과 같은 양의 이소프로판올을 첨가하여 실온에서 10분 방치한다. 4℃, 12,000×g 에서 10분간 원심분리하면 RNA는 튜브바닥에 가라앉는다.
7. 상층액을 버리고 RNA pellet을 1 ㎖의 75% 에탄올로 1회 washing 한 후, 4℃, 7,500×g 에서 5분간 원심분리한다.
8. 상층액을 제거한 후 남은 Pellet은 실온에서 건조 후 적정량의 RNase-free water에 녹인다.
주의) RNA의 용해가 어려워질 있으니 원 건조와 가열하여 건조하지 않는다.

2. 결과
아래의 식물 조직에서 상기 방법으로 Fruit-mate를 처리한 경우와 처리하지 않은 경우의 total RNA 추출 효과를 비교하였다.

그림. Fruit-mate 처리(+)/무 처리(-)후에 RNAiso Plus에서 추출한 total RNA의 전기 영동 결과

Keyword : RNA 추출,RNA추출,RNA purification

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