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AAV 생산효율이 더욱 높아진 업그레이드 제품
VirusGEN® AAV Transfection Kit with RevIT™ AAV Enhancer (Code MIR 8007)을 확인하세요!
- 높은 감염활성을 가지는 고품질의 Adeno associated virus (AAV) 생산에 최적
- HEK293 세포 배양 시스템에 최적 (adherent 및 suspension 배양 모두 적용)
- 연구용 시약부터 전임상 단계, 임상용 GMP grade까지 라인업
제품설명
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent는 expression vector와 packaging plasmid를 HEK293 타입의 패키징 세포로 효율적으로 도입하여, AAV 또는 Lentivirus의 생산율을 높여주는 transfection 시약이다.
그 중에서도 본 VirusGEN® AAV Transfection Kit 제품은 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent를 기반으로 plasmid 도입 효율을 높이기 위한 VirusGEN® AAV Complex Formation Solution and Enhancer가 추가되어 AAV의 효율적인 생산을 위해 최적화된 제품이다.
VirusGEN® SELECT AAV Transfection Kit는 전임상 연구 및 공정 개발에서 필요한 대규모 바이러스 생산을 위한 최적의 시약으로 간편하고 비용 효율적인 실험 프로세스를 제공한다. 또한 전임상용 바이러스 벡터 제작을 위한 transfection 시약으로 사용할 수 있도록 품질 보증 시험을 완료하였다.
([Example Certificate of Origin (PDF) | Example Certificate of Analysis (PDF) | Example BSE TSE Statement (PDF)])
따라서, 임상 시험 또는 상업적인 바이러스 생산을 위해 VirusGEN® GMP AAV Transfection Kit를 사용할 수 있다.
그림1. 타사대비 높은 AAV functional titer
Suspension 형태로 배양한 Freestyle 293-F세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A)와 Adherent 형태로 배양한 293T/17세포(B)에 Trans IT-VirusGEN® Transfection Reagent (reagent : DNA (vol : wt) = 2 : 1), 타사 B4, 타사 B5, 타사 C3 (25kDa PEI)를 사용하여 pAAV-hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper (1 : 1 : 1 ratio, 1.5 ㎍/㎖, Agilent Technologies)를 transfection 하여 바이러스를 생산하였다. 생산된 바이러스는 HT1080세포에 감염, 48시간 뒤 GFP발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.
그림 2. TransIT-VirusGEN® Reagent, VirusGEN® AAV Transfection Kit - 타사 제품과의 생산효율 비교
TransIT-VirusGEN® Reagent와 VirusGEN® AAV Transfection Kit, 타사 A1, 타사 A3을 이용하여 AAV2의 생산효율을 비교하였다. Expi293 Expression Media (Thermo Fisher Scientific)에서 배양한 Expi293F cells (Thermo Fisher Scientific)에 pAAV-hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 2 ㎍/㎖ - 2 ㎎ per flask, Agilent Technologies)를 도입하고 72시간 후 lysis 시켜 AAV를 회수하였다.
A. 회수한 바이러스를 HT10180세포에 감염시키고 48시간 후에 GFP의 발현을 확인하여 역가를 측정하였다. 또 도입된 AAV의 genome copy number는 CMV promoter 영역을 ddPCR로 확인하였다.
B. 제작된 바이러스 capsid수는 AAV2 Titration ELISA Kit (Progen)을 이용하여 측정했다. 또 GC/capsid의 비율을 계산하였다
그 결과, TransIT-VirusGEN® Reagent, VirusGEN® AAV Transfection Kit를 이용했을 때 더 많은 역가의 AAV를 생산할 수 있었고, 특히 VirusGEN® AAV Transfection Kit를 이용하였을 때 가장 많은 양의 AAV를 생산할 수 있었다.
보존
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent: -10~-30℃ 보존
VirusGEN® AAV Complex Formation Solution and Enhancer : 2~10℃
(SELECT, GMP 모두 동일)
관련제품
- 다양한 Serotype의 vector system: AAVpro® Helper Free System (AAV1, 2, 5, 6)
- CRISPR/Cas9 Vector System: AAVpro® CRISPR/Cas9 Helper Free System (AAV2)
- AAV extraction: AAVpro® Extraction Solution
- Cell에서 정제: AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
- 배양배지와 cell에서 모두 정제: AAVpro® Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)
- AAV titration: AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)
- Packaging (293T Cell Line): AAVpro® 293T Cell Line
