- 다양한 serotype의 AAV를 고순도로 정제 가능
- 복잡하고 시간이 오래 소요되는 Ultracentrifuge 과정 불필요
- 독자적인 AAV 추출법으로 Freeze/thaw, sonication 불필요 (특허 출원 중)
- 독자적인 AAV 정제방법으로 cell lysate 등을 효율적으로 제거 (특허 출원 중)
- Producing cell 에서의 AAV 추출부터 정제에 필요한 모든 component 포함
제품 설명
Adeno-Associated Virus (AAV)는 분열, 비분열 세포에 유전자 도입이 가능하며, 특히 비분열 세포에 대해 장기간 유전자 발현이 가능하며 특히, 면역원성 (immune response)이 낮아 in-vivo
실험에 최적화된 virus이다.
in-vivo 실험에 적용하는 경우, 독성을 감소시키기 위하여 Packaging cell line 또는 배지 유래의 불순물을 제거하여 고순도로 정제된 AAV를 사용하는 것은 매우 중요하다.
또한, culture cell의 경우에도 AAV를 정제하여 사용하면 불순물에 의한 영향을 최소화할 수 있다.
AAV 정제에는 일반적으로 CsCl2/iodixanol gradient ultracentrifugation 법이 사용되지만 고도의 숙련된 기술을 필요로 하며, 회수율이 낮고, 시간이 오래 소요되는 단점이 있다.
본 제품은 약 4시간만에 다양한 serotype의 AAV를 간편하고 효율적으로 정제할 수 있는 kit로, 독자적인 AAV extraction 방법을 사용하므로 Freeze/thaw법, sonication법과 같이 번거로운 조작이 불필요하고,
자체 개발한 AAV 정제방법을 이용하여 간단하게 세포, 배지유래 불순물을 제거하고 고순도의 AAV를 정제할 수 있다.
AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)에는 T225 flask 5개 분량, AAVpro® Purification Kit Midi (All Serotypes)에는 T225 flask 1개 분량의 producing cell에서 AAV를 정제하기 위한 buffer, concentration column 4회분을 포함하고 있다.
[Maxi kit와 Midi kit에 사용할 수 있는 샘플양]
|
|
|
1회 정제당
적용가능한 샘플 양* |
Code |
제품명 |
용량 |
T225
flask |
15 cm
dish |
6666 |
AAVpro® Purification Kit Maxi (All Serotypes) |
4 purifications |
x5 |
x7.5 |
6675 |
AAVpro® Purification Kit Midi (All Serotypes) |
4 purifications |
x1 |
x1.5 |
*해당 분량의 AAV producing cell을 정제에 사용
*[안내] 신제품 AAVpro® Purification Kit Midi (All Serotypes)의 출시에 따라 기존 AAVpro® Purification Kit (All Serotypes) (Code 6666)의 제품명이 AAVpro® Purification Kit Maxi (All Serotypes) 로 변경되었습니다.
제품명 이외에 제품코드, 구성품, 가격, 사용횟수와 방법은 변경되지 않았으니 이용에 참고 바랍니다.
Workflow
내용
| |
|
Maxi
(Code 6666) |
Midi
(Code 6675) |
| 1. |
AAV Extraction Solution A plus |
22 ㎖× 2개 |
4.4 ㎖× 2개 |
| 2. |
AAV Extraction Solution B |
4.5 ㎖ |
0.9 ㎖ |
| 3. |
Precipitator A*1 |
5 ㎖ |
1 ㎖ |
| 4. |
Precipitator B |
2.5 ㎖ |
0.5 ㎖ |
| 5. |
Millex-HV 0.45μm |
4개 |
4개 |
| 6. |
Amicon Ultra-15 또는 -4, 100 kDa |
4개 |
4개 |
| 7. |
Suspension Buffer |
60 ㎖× 2개 |
12 ㎖× 2개 |
| 8. |
Cryonase Cold-active Nuclease |
500 ㎕ |
100 ㎕ |
*1 저온 보존에 의해 백색 침전물이 생기는 경우, 37℃에서 완전히 용해 후 사용하세요
보존
Cryonase Cold-active Nuclease |
-20℃ |
그 외 |
실온 |
AAVpro® Purification Kit Maxi (All Serotypes) 적용 예 - 다양한 serotype의 AAV 정제 및 감염 능력 확인
1) AAV 정제 및 순도 측정
T225 flask 5개 분량의 producing cell로부터 본 제품을 이용하여 형광단백질 ZsGreen 1을 포함하는 다양한 serotype의 AAV를 정제하였다.
AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)로 정제된 AAV의 역가를 측정하여
1 x109 vg/lane으로 SDS-PAGE를 수행하였다. 그 결과 AAV Capsid 단백질 VP1, VP2, VP3 band를 확인하였다.
2) 정제된 AAV의 감염 효율 비교
정제 후 각 serotype의 AAV를 이용하여 cell line별 감염 역가를 확인하였다.
정제된 AAV를 5,000 vg/cell (serotype 1, 2, 3, 6) 또는 50,000 vg/cell (serotype 5)으로 감염시키고 3일 후에 후로 cytometry 해석을 실시한 결과, 본 제품으로 정제한 AAV는 감염능력을 보유하고 있음을 확인하였다.
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