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Cloned

SP6 RNA Polymerase

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2520A	SP6 RNA Polymerase	3,000 U	232,000원
Takara	2520B	SP6 RNA Polymerase	15,000 U (2520A x 5)	1,050,000원

Product index

in vitro transcription

제품설명

본 효소는 SP6 promoter를 포함한 이중 가닥 DNA를 주형, NTP를 기질로 사용하여 promoter 하류의 주형 DNA에 상보적인 단일 가닥 RNA를 합성한다. SP6 promoter 서열에 높은 특이성을 보이고 다른 생물 유래의 promoter는 인식하지 않는다.

보존

-20℃

농도

50 U/㎕

형상

10 mM	Potassium Phosphate (pH7.9)
1 mM	DTT
0.1 mM	EDTA
150 mM	NaCl
50%	Glycerol

첨부 buffer 조성 (10x)

400 mM	Tris-HCl (pH7.5)
60 mM	MgCl₂
20 mM	Spermidine
100 mM	DTT [별첨]
0.1%	BSA [별첨]

활성의 정의

37℃, pH7.5에서 1 시간 동안 1 nmol의 [³H]GMP를 산성의 침전물로(acid-insoluble products)로 합성하는 효소활성을 1 U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

40 mM	Tris-HCl (pH7.5)
6 mM	MgCl₂
10 mM	DTT
2 mM	Spermidine
각 0.5 mM	ATP, UTP, CTP
0.5 mM	[³H]GTP
0.01%	BSA
1 ㎍/100 ㎕	pSP65 DNA

사용상의 주의

- 최적 pH는 7.5이다.
- Mg²⁺와 환원제를 필요로 하고, BSA 및 Spermidine의 첨가에 의해 활성화된다.
- 사용시에는 첨부 buffer에 반드시 DTT와 BSA를 첨가한다. 미포함 시 활성이 나타나지 않을 수 있다.
- 최적 온도는 40℃ (37℃의 약 130% 활성)에서 효소량은 300 U/㎖까지, 주형량은 100 ㎍/㎖까지 합성량이 정비례하게 된다. 반응시간이 1시간을 넘는 경우 37℃에서 반응을 추천하다.
- 특정 영역만의 전사 효율을 높이려면, 그 영역의 하류의 주형 DNA를 평활말단 (blunt end) 또는 5’-돌출말단(5’-overhang)으로 절단하는 것을 추천한다.

용도

- 강하게 표식된 RNA probe 제작
- RNA splicing 반응 전구체 제작
- Cap analog를 primer로 이용한 capped mRNA의 제작

기원

Escherichia coli carrying the plasmid containing phage SP6 RNA polymerase gene

일반적 성질

- 분자량: 약 96,000
- Subunit: single stranded polypeptide
- 최적 pH: pH7.5
- 보조인자
Mg²⁺ (최적농도: 6 mM)
환원제 (10 mM DTT 또는 20 mM 2-mercaptoethanol)
- 활성화제: 2 mM spermidine (4 mM에서는 DNA와 공침)
- 저해제: MEM (10^-4 M), pCMB (5X10^-8 M)에서 불활성화

상대 활성

- 반응 온도와 상대 활성 (37℃을 100%로 했을 때)

반응 온도 (℃)	20	25	37	40	45
상대 활성 (%)	0	10	100	130	80

- pH와 상대활성

pH	7.5	7.7	7.8	8.0
상대 활성 (%)	100	75	33	4

Keyword :

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