*이 제품은 반응성을 높여 IVT (
in vitro transcription) 실험을 고효율로 진행할 수 있도록
T7 RNA Polymerase ver.2.0 (Code 2541A)으로 업그레이드 됐습니다.
제품설명
본 효소는 T7 promoter를 포함한 이중 가닥 DNA를 주형, NTP를 기질로 사용하여 promoter 하류의 주형 DNA에 상보적인 단일 가닥 RNA를 합성한다. T7 promoter 서열에 높은 특이성을 보이고 다른 생물 유래의 promoter를 인식하지 않는다.
보존
-20℃
농도
50 U/㎕
형상
20 mM |
Potassium Phosphate 완충용액 (pH7.9) |
1 mM |
DTT |
0.1 mM |
EDTA |
100 mM |
NaCl |
50% |
Glycerol |
첨부 buffer 조성 (10x)
400 mM |
Tris-HCl (pH8.0) |
80 mM |
MgCl2 |
20 mM |
Spermidine |
50 mM |
DTT [별첨] |
활성의 정의
37℃, pH8.0에서 1 시간 동안 1 nmol의 [3H]GMP를 산성의 침전물로(acid-insoluble products) 합성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성
40 mM |
Tris-HCl (pH8.0) |
8 mM |
MgCl2 |
5 mM |
DTT |
2 mM |
Spermidine |
각 0.4 mM |
ATP, UTP, CTP |
0.4 mM |
[3H]GTP |
1 ㎍/50 ㎕ |
pT7-2 DNA |
용도
- 단일 가닥 RNA의 합성
- 강하게 표식된 RNA probe 제작
- siRNA 전구체 제작
- RNA splicing 반응의 전구체 제작
- Cap analog를 primer로 이용한 capped mRNA의 제작
기원
Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T7 RNA polymerase gene
일반적 성질
- 분자량: 약 98,000
- subunit: single standed polypeptide
- 최적 pH: pH8.0
- 보조인자
Mg2+ (최적농도: 8 mM)
환원제 (5 mM DTT)
- 활성화제: 2 mM spermidine (4mM에서는 DNA와 공침)
- 저해제: MEM (10-4 M), pCMB (5X10-8 M)에서 불활성화
상대 활성
- 반응 온도와 상대 활성 (37℃을 100%로 했을 때)
| 반응 온도 (℃) |
20 |
25 |
37 |
상대 활성 (%) |
10 |
50 |
100 |
- pH와 상대활성
| pH |
7.5 |
7.7 |
7.8 |
8.0 |
상대 활성 (%) |
17 |
62 |
70 |
100 |
