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RNA의 5’ 말단을 Cap 0 → Cap 1로 변환하는 효소

mRNA Cap 2-O-Methyltransferase

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 2470A
 mRNA Cap 2-O-Methyltransferase
관련학술 구매하기 		2,500 U
 114,000원  2470A_DS.v2208Da.pdf
Takara
 2470B
 mRNA Cap 2-O-Methyltransferase
관련학술 구매하기 		10,000 U (2470A x 4)
 412,000원 

  • 7-methylguanylate(m7G) cap 구조 (Cap 0)를 가진 RNA의 첫번째 nucleotide 2’-O 부위를 특이적으로 메틸화
  • mRNA의 면역원성 감소
  • mRNA의 translation 효율 증가
제품설명
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (2’-O-MTase)는 vaccinia 바이러스 유래의 methyltransferase로 5’ 말단에 Cap 0 구조 (7-methylguanylate(m7G))를 가진 RNA에 첫번째 nucleotide의 2’-O 부위를 특이적으로 메틸화하여 Cap 1의 구조로 만든다. RNA에서 Cap 1의 구조는 체내에서 면역원성을 감소시키고 translation 효율을 증가시키는 것으로 알려져 있다.
이 제품에는 반응 buffer와 메틸기의 공여체 S-adenosylmethionine (SAM)이 포함되어 있어 고효율로 Cap 0 RNA에서 Cap 1 RNA를 제작할 수 있다.
또한 이 효소는 Vaccinia Capping Enzyme (Code 2460A)와 같이 사용하여 uncapped RNA (5’-triphosphate RNA)로부터 Cap 1의 구조를 가진 RNA를 one-step으로 제작할 수 있다 (사용자 메뉴얼 protocol-2 참고).
용도
- Vaccinia Capping Enzyme (VCE) 등으로 m7G cap구조 (Cap 0)가 부가된 RNA를 Cap 1 구조로 변환.
- One-step으로 uncapped RNA (5’-triphosphate RNA)에 Cap 1의 구조 부여 (※별도의 VCE 필요).
- in vitro transcription (IVT) 등으로 합성한 m7G cap구조 (Cap 0)를 갖는 RNA를 Cap 1 구조로 변환 (ARCA (anti reverse cap analog) 사용 시).
- mRNA의 in vivo 적용 시 translation 효율 증가 및 면역원성 감소
내용

2,500 U

 

mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase (50 U/㎕)

100 ㎕

 

10× Capping Buffer

100 ㎕

 

S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM)
보존 -20℃
농도 50 U/㎕
기원
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for vaccinia virus mRNA cap 2’-O-methyltransferase
일반적인 성질
- 질량: 약 40 kDa
활성의 정의
37℃에서 1시간동안 10 pmol의 Cap 0 RNA를 메틸화하는 효소 양을 1U으로 한다.
활성 측정용 반응제 조성

1×

 

Capping Buffer

1 mM

 

DTT

13.75 μCi/㎖

 

[3H]SAM

2 ㎍/50 ㎕

 

100 nt Cap 0 RNA
사용상의 주의
- 효소의 강한 교반은 삼가한다.
- Template RNA 및 실험 기구에 RNase가 오염된 경우 RNA의 yield가 낮아지거나 fragmentation 된다. 반응에 사용하는 튜브, micropipette tip 등을 RNA실험 전용으로 사용하고 일회용 장갑을 사용하여 RNase의 오염이 일어나지 않도록 주의한다.
실험 예시
- 사용자 메뉴얼 참고
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Keyword :
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