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Home > 전제품보기 > Gene transfer (virus) > Recombinant Lentivirus 관련 > 신속한 Lentivirus Titer 측정 키트

신속한 Lentivirus Titer 측정 키트

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Clontech
631235
Lenti-X qRT-PCR Titration Kit
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200 회
639,200원 
799,000원
가격할인
11.01 ~ 11.30
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17242
Clontech
631239
Lenti-X Provirus Quantitation Kit
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
200 회
609,600원 
762,000원
가격할인
11.01 ~ 11.30
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17578
Clontech
632200
Lenti-X p24 Rapid Titer Kit
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96 회
722,400원 
903,000원
가격할인
11.01 ~ 11.30
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17245

  • 바이러스 농축, 역가 측정, 세포 감염까지 하루만에 전과정 가능
  • HIV-1 기반 또는 MMLV 기반의 viral vector와 함께 사용하는 qRT-PCR kit
  • p24 ELISA를 이용하여 lentivirus 상층액으로부터 역가 측정
  • 정확한 역가 측정으로 매우 일관성있는 세포 감염 가능

Lenti-X와 Retro-X qRT-PCR Titration Kit는 바이러스 용액의 역가를 측정 하기 위한 매우 빠르고 간단한 방법이다. 본 Kit는 간단하게 RNA 정제를 실시한 후 qRT-PCR과 Intercalater 기술을 이용하여 viral genome의 양을 측정한다. 일반적인 역가 측정 방법이 10 일 정도 소요되는 반면, 역가 측정 kit를 이용하면 단지 4 시간 만에 측정이 가능하며 HIV-1 계열 lentiviral vector 뿐만 아니라 MMLV 계열 retroiviral vector (pMSCV vector 제외)에도 이용할 수 있다.
qRT-PCR을 이용하면 바이러스 농축과 목적 세포 감염 단계 사이의 시간적인 간격을 극적으로 단축시킬 수 있기 때문에, 바이러스 농축부터 목적 세포 감염까지를 같은 날에 수행 할 수 있다 (Figure 1). 실험 지연으로 인한 바이러스 감염 능력의 저하를 방지하고 MOI (multiplicity of infection)에 따른 일관성 있는 세포 감염 결과를 얻을 수 있다.
qRT-PCR 역가 측정 방법
본 제품은 One-Step qRT-PCR을 이용하여 시료와 control RNA (kit에 제공)를 serial dilution하고, 희석된 시료의 copy수를 standard curve의 Ct 값과 비교하여 간단하게 역가를 결정할 수 있다. 제품은 200 회의 qRT-PCR 반응을 수행할 수 있는 반응 시약과 발현되어지는 서열 (cDNA나 shRNA)과 상관없이 HIV-1기반의 lentivirus 또는 MMLV 기반의 retroivirus vector 양쪽 모두에 사용할 수 있는 역가 측정용 primer set로 구성되어 있다. Vector가 다양해도 기본 골격 구조가 동일하여 검출방법이나 selectable marker를 변경하지 않고도 한번에 역가를 측정할 수 있으며, viral RNA 정제와 DNaseI 처리 단계를 통하여 잔존 가능성이 있는 plasmid DNA를 제거하여 일시적 transfection으로부터 생성된 바이러스들을 최소한의 시료를 사용하여도 정확하게 정량할 수가 있다.
Figure 1. Flowchart of the procedures used for titrating viral supernatants with Clontech's qRT-PCR virus titration kits.

Lentiviral p24 Titration Kit
Lenti-X p24 Rapid Titer Kit는 바이러스 상층액내에 존재하는 p24 capsid 단백질의 잔존량을 측정하는 특이성 높은 ELISA법을 이용한다. p24의 양은 바이러스 역가와 직접적 상관관계가 있다. 용해된 바이러스 시료를 antip24 capture antibody로 코팅된 96-well plate (12 개의 8-well strip으로 분리 가능)에 넣고, 세척 후 결합된 p24는 biotinylated anti-p24 2차 항체와streptavidin-HRP, 발색 시약을 첨가하여 측정한다. p24 control을 이용하여 표준 곡선을 만들고, p24를 동량으로 조정하고 상층액의 역가를 산출한다.


Figure 2. Schematic of the Lenti-X p24 Rapid Titer Procedure. p24 from the culture supernatant is lysed and bound to anti-p24 coated wells and detected using a combination of biotinylated anti-p24 secondary antibody, streptavidin-HRP, and a color reagent.

Lenti-X Provirus Quantitation Kit
삽입된 렌티바이러스의 카피수를 신속하게 측정
  • Transduction된 세포로부터 integrated lentivirus (provirus)의 카피수를 측정
  • 실험 조건이나 세포 종류가 달라져도 형질전환시의 감염력을 일정하게 유지하기 위해 사용

렌티바이러스를 감염시킨 세포의 genomic DNA 중에 삽입된 렌티바이러스(provirus)의 카피수를 신속하게 측정하기 위한 제품이다. 프로바이러스 카피수 측정을 통해 바이러스의 실제 유효한 역가(예: 효과적인 역가)를 확인하고 정확한 MOI(multiplicity of infection)로 타겟 세포에 감염이 가능해진다.



Figure3. Measuring lentiviral copy number in target cells. Provirus content is determined using a rapid qPCR method.
Lenti-X GoStix (간이 Lentivirus 역가 측정 시약)
30초~10분이면 Lentivirus titer가 실험에 충분한지, 불충분한지 확인 가능한 instant lentiviral 역가 측정 키트로 대략적으로 >5x105IFU/ml 이상인지 아닌지를 확인 할 수 있어 lentivirus 제작 직후 또는 농축 직후에 간편하게 확인할 때 유용하게 사용할 수 있다.
Lenti-X GoStix
관련제품

용도

제품명

Code

Size

바이러스 농축

Lenti-X Concentrator

631231

100 ml

바이러스 정제

Lenti-X Maxi Purification Kit

631233

2 prep

Transduction 효율 증가

Lenti-X Accelerator

631256

400 μl

Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
References
1. Kustikova, O. S. et al. (2003) Blood 102(12):3934-3937. 2. Tseng, W. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(41):25641-25647. 3. Sastry, L. et al. (2002) Gene Ther. 9(17):1155-1162. 4. Rapid Lentiviral & Retroviral Titration Kits (January 2008) Clontechniques XXII(1):1-3.

Keyword :
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