• 높은 감염활성을 가지는 고품질의 Adeno associated virus (AAV), Lentivirus 생산
• HEK293 세포 배양 시스템에 최적 (adherent 및 suspension 배양 모두 적용)
• 연구용 시약부터 전임상 단계 라인업
• AAV 생산, Lentivirus 생산 각각에 최적의 Transfection Kit 제공 (#MIR 6750 / MIR 6760)

제품설명

TransIT-VirusGEN^® Transfection Reagent는 transfer vector와 packaging vector를 HEK293 타입의 패키징 세포로 효율적으로 도입하여, AAV 또는 Lentivirus의 생산율을 높여주는 transfection 시약이다.
VirusGEN^® AAV Transfection Kit및 VirusGEN^® LV Transfection Kit는 TransIT-VirusGEN^® Transfection Reagent를 기반으로 plasmid 도입 효율를 높이기 위한 enhancer / complex formation 시약이 추가된 kit로 각각 AAV와 Lentivirus의 효율적인 생산을 위해 최적화된 제품이다.
TransduceIT™ Transduction Reagent는 hexadimethrine bromide 으로, 이를 사용하면 lentivirus 또는 retrovirus transduction 효율을 높일 수 있다.
*임상시험을 위한 Viral vector 대량생산용 transfection 시약은 TransIT-VirusGEN^® SELECT를 확인하세요.


그림1. 타사대비 높은 AAV functional titer
Suspension 형태로 배양한 Freestyle 293-F세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A)와 Adherent 형태로 배양한 293T/17세포(B)에 Trans IT-VirusGEN^® Transfection Reagent (reagent : DNA (vol : wt) = 2 : 1), A사제품1, A사제품2, 25kDa PEI를 사용하여 pAAV-hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper (1 : 1 : 1 ratio, 1.5 ㎍/㎖, Agilent Technologies)를 transfection 하여 바이러스를 생산하였다. 생산된 바이러스는 HT1080세포에 감염, 48시간 뒤 GFP발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.


그림2. 타사대비 높은 Lentivirus functional titer
Suspension 형태로 배양한 Freestyle 293-F세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A), Adherent 형태로 배양한 293T/17세포(B)에 TransIT-VirusGEN^® Transfection Reagent (reagent : DNA (vol : wt) = 3 : 1), A사제품1, A사제품2, 25kDa PEI를 사용하여 pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP transfer vector, MISSION Lentivirus Packaging Mix (1 : 1 ratio, 1 ㎍/㎖)을 transfection 하였다. Transfection된 세포의 배양 상층액을 0.45 ㎛ 필터로 여과하여 8 ㎍/㎖TransduceIT™ 과 함께 293T/18에 감염시켰다. 72시간 뒤 GFP발현을 유세포측정기로 측정하였다.
Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.


그림3. 다양한 AAV 생산 스케일에 적용 가능
Suspension 형태로 배양한 FreeStyle 293-F 세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A), Adherent 형태로 배양한 293T / 17 세포(B)에 TransIT-VirusGEN^® Transfection Reagent를 사용하여 pAAV -hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper (1 : 1 : 1 ratio, 1.5 ㎍/㎖, Agilent Technologies)를 transfection하여 바이러스를 생산하였다 (reagent : DNA (vol : wt) = 2 : 1). 생산된 바이러스는 HT1080 세포에 감염, 48 시간 뒤에 GFP 발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.


그림 4. TransIT-VirusGEN^® Reagent, VirusGEN^® AAV Transfection Kit - 타사 제품과의 생산효율 비교
TransIT-VirusGEN^® Reagent와 VirusGEN^® AAV Transfection Kit, A사 제품1, A사 제품 3을 이용하여 AAV2의 생산효율을 비교하였다. Expi293 Expression Media (Thermo Fisher Scientific)에서 배양한 Expi293F cells (Thermo Fisher Scientific)에 pAAV-hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 2 ㎍/㎖ - 2 ㎎ per flask, Agilent Technologies)를 도입하고 72시간 후 lysis 시켜 AAV를 회수하였다.
A. 회수한 바이러스를 HT10180세포에 감염시키고 48시간 후에 GFP의 발현을 확인하여 역가를 측정하였다. 또 도입된 AAV의 genome copy number는 CMV promoter 영역을 ddPCR로 확인하였다.
B. 제작된 바이러스 capsid수는 AAV2 Titration ELISA Kit (Progen)을 이용하여 측정했다. 또 GC/capsid의 비율을 계산하였다
그 결과, TransIT-VirusGEN^® Reagent, VirusGEN^® AAV Transfection Kit를 이용했을 때 더 많은 역가의 AAV를 생산할 수 있었고, 특히 VirusGEN^® AAV Transfection Kit를 이용하였을 때 가장 많은 양의 AAV를 생산할 수 있었다.


그림 5. TransIT-VirusGEN^® Reagent, VirusGEN^® LV Transfection Kit - 타사 제품과의 생산효율 비교
TransIT-ViruGEN^® Transfection Reagent, VirusGEN^® LV Transfection Kit, A제품 3, C제품 1을 이용하여 lentivirus의 생산 능력을 비교하였다. Expi293 Expression Media (Thermo Fisher Scientific)에서 배양한 Expi293F cells (Thermo Fisher Scientific)에 plasmid set (A. pALD-Lenti EGFP-A transfer vector, pALD-VSV-G-A, pALD-Rev-A와 pALD-GagPol-A packaging vectors (DNA비율 3:0.5:0.5:2, Aldevron), B. pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP transfer vector (Millipore Sigma), ViraSafe Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, CellBio Lab) DNA비율 3:0.5:0.5:2)을 유전자 도입하고 바이러스를 회수하였다. 회수한 바이러스를 293T/17세포에 감염시키고 72시간 후에 GFP의 발현을 확인하여 역가를 측정하였다.
그 결과, TransIT-VirusGEN^® Reagent, VirusGEN^® LV Transfection Kit를 이용했을 때 더 많은 역가의 lentivirus를 생산할 수 있었고, 특히 VirusGEN^® LV Transfection Kit를 이용하였을 때 가장 많은 양의 lentivirus를 생산할 수 있었다.

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