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RNA의 5’-말단에 Cap (Cap 0)을 부가하는 효소

Vaccinia Capping Enzyme

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 2460A
 Vaccinia Capping Enzyme
관련학술 구매하기 		500 U
 276,000원  2460A_DS.v2208Da.pdf
Takara
 2460B
 Vaccinia Capping Enzyme
관련학술 구매하기 		2,000 U (2460A x 4)
 992,000원 

  • 5’-triphosphate RNA에 7-methylguanylate(m7G) cap 부여 (Cap 0 구조)
제품설명
Vaccinia Capping Enzyme (VCE)은 vaccinia 바이러스 유래의 capping enzyme으로 RNA (5’-triphosphate)의 5’ 말단에 7-methylguanylate(m7G) cap 구조를 부가하는 효소이다. 진핵생물에서 이러한 Cap 구조는 mRNA의 stabilization, nuclear export 및 translation에서 매우 중요한 역할을 한다.
이 효소는 2개의 subunit (D1, D12)으로 이루어져 RNA triphosphatase, guanylyltransferase, guanine methyltransferase의 세가지 효소 활성을 나타낸다. 이 제품은 효소를 활성화시키기 위한 모든 구성품 (10×Capping Buffer, S-adenosylmethionine (SAM) 및 GTP)을 포함하고 있어, in vitro 상에서 Cap 0 구조를 가진 RNA를 제작하는데 사용할 수 있다.
또한 이 효소를 mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (Code 2470A)와 같이 사용하면 Cap 0 구조를 가진 RNA의 첫번째 nucleotide 2’-O 부위를 메틸화하여 Cap 1 구조를 가진 RNA를 one-step으로 제작할 수 있다 (사용자 메뉴얼 protocol-2 참고).
용도
- in vitro trnascription (IVT)등으로 합성된 RNA의 5’-capping (Cap 0) 구조 부가
(Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)와 같이 사용 가능)
- mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (Code 2470A)와 같이 사용하여 one-step으로 RNA의 5’-cap (Cap 1) 구조 부가
- mRNA의 5’ 말단 labelling
내용

500 U

 

Vaccinia Capping Enzyme (10 U/㎕)

100 ㎕

 

10× Capping Buffer

100 ㎕

 

S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM)

50 ㎕

 

GTP (10 mM)
보존 -20℃
농도 10 U/㎕
기원
Escherichia coli carrying plasmids containing the genes for vaccinia virus capping enzyme
일반적인 성질
- 질량: 약 98 kDa 및 33 kDa (heterodimer)
활성의 정의
37℃에서 1시간 동안 10 pmol의 [α-32P]GTP를 RNA transcript에 부가하는 효소량을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응제 조성

1×

 

Capping Buffer

1 μM

 

GTP

10 μCi/㎖

 

[α-32P]GTP

0.67 mM

 

SAM

2.5 ㎍/50 ㎕

 

100 nt RNA
사용상의 주의
- 효소의 강한 교반은 삼가한다.
- Template RNA 및 실험 기구에 RNase가 오염된 경우 RNA의 yield가 낮아지거나 fragmentation 된다. 반응에 사용하는 튜브, micropipette tip 등을 RNA 실험 전용으로 사용하고 일회용 장갑을 사용하여 RNase의 오염이 일어나지 않도록 주의한다.
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Keyword : VCE
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