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Home > 전제품보기 > Transfection 시약 > 효율증대를 위한 특수도입시약 > TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent
고역가의 AAV, Lentivirus 생산을 위한

TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Mirus
MIR 6700
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent
관련학술 구매하기 샘플신청 
1.5 ㎖
가격문의   transit-virusgen-transfection.pdf
Mirus
MIR 6703
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent
관련학술 구매하기
0.3 ㎖
가격문의  
Mirus
MIR 6704
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent
관련학술 구매하기
0.75 ㎖
가격문의  
Mirus
MIR 6705
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent
관련학술 구매하기
5 x 1.5 ㎖
가격문의  
Mirus
MIR 6706
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent
관련학술 구매하기
10 x 1.5 ㎖
가격문의  
Mirus
MIR 6750
VirusGEN® AAV Transfection Kit
관련학술 구매하기
1 Kit
가격문의   virusgen-aav-transfection-kit-protocol.pdf
Mirus
MIR 6760
VirusGEN® LV Transfection Kit
관련학술 구매하기
1 Kit
가격문의   virusgen-lv-transfection-kit-protocol.pdf
Mirus
MIR 6620
TransduceIT™ Transduction Reagent
관련학술 구매하기
1 ㎖
가격문의   transduceit-reagent-pds.pdf



  • 높은 감염활성을 가지는 고품질의 Adeno associated virus (AAV), Lentivirus 생산
  • HEK293 세포 배양 시스템에 최적 (adherent 및 suspension 배양 모두 적용)
  • 연구용 시약부터 전임상 단계 라인업
  • AAV 생산, Lentivirus 생산 각각에 최적의 Transfection Kit 제공 (#MIR 6750 / MIR 6760)
제품설명
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent는 transfer vector와 packaging vector를 HEK293 타입의 패키징 세포로 효율적으로 도입하여, AAV 또는 Lentivirus의 생산율을 높여주는 transfection 시약이다.
VirusGEN® AAV Transfection Kit및 VirusGEN® LV Transfection Kit는 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent를 기반으로 plasmid 도입 효율를 높이기 위한 enhancer / complex formation 시약이 추가된 kit로 각각 AAV와 Lentivirus의 효율적인 생산을 위해 최적화된 제품이다.
TransduceIT™ Transduction Reagent는 hexadimethrine bromide 으로, 이를 사용하면 lentivirus 또는 retrovirus transduction 효율을 높일 수 있다.
*임상시험을 위한 Viral vector 대량생산용 transfection 시약은 TransIT-VirusGEN® SELECT를 확인하세요.


그림1. 타사대비 높은 AAV functional titer
Suspension 형태로 배양한 Freestyle 293-F세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A)와 Adherent 형태로 배양한 293T/17세포(B)에 Trans IT-VirusGEN® Transfection Reagent (reagent : DNA (vol : wt) = 2 : 1), A사제품1, A사제품2, 25kDa PEI를 사용하여 pAAV-hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper (1 : 1 : 1 ratio, 1.5 ㎍/㎖, Agilent Technologies)를 transfection 하여 바이러스를 생산하였다. 생산된 바이러스는 HT1080세포에 감염, 48시간 뒤 GFP발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.


그림2. 타사대비 높은 Lentivirus functional titer
Suspension 형태로 배양한 Freestyle 293-F세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A), Adherent 형태로 배양한 293T/17세포(B)에 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent (reagent : DNA (vol : wt) = 3 : 1), A사제품1, A사제품2, 25kDa PEI를 사용하여 pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP transfer vector, MISSION Lentivirus Packaging Mix (1 : 1 ratio, 1 ㎍/㎖)을 transfection 하였다. Transfection된 세포의 배양 상층액을 0.45 ㎛ 필터로 여과하여 8 ㎍/㎖TransduceIT™ 과 함께 293T/18에 감염시켰다. 72시간 뒤 GFP발현을 유세포측정기로 측정하였다.
Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.


그림3. 다양한 AAV 생산 스케일에 적용 가능
Suspension 형태로 배양한 FreeStyle 293-F 세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A), Adherent 형태로 배양한 293T / 17 세포(B)에 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent를 사용하여 pAAV -hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper (1 : 1 : 1 ratio, 1.5 ㎍/㎖, Agilent Technologies)를 transfection하여 바이러스를 생산하였다 (reagent : DNA (vol : wt) = 2 : 1). 생산된 바이러스는 HT1080 세포에 감염, 48 시간 뒤에 GFP 발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.


그림 4. TransIT-VirusGEN® Reagent, VirusGEN® AAV Transfection Kit - 타사 제품과의 생산효율 비교
TransIT-VirusGEN® Reagent와 VirusGEN® AAV Transfection Kit, A사 제품1, A사 제품 3을 이용하여 AAV2의 생산효율을 비교하였다. Expi293 Expression Media (Thermo Fisher Scientific)에서 배양한 Expi293F cells (Thermo Fisher Scientific)에 pAAV-hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 2 ㎍/㎖ - 2 ㎎ per flask, Agilent Technologies)를 도입하고 72시간 후 lysis 시켜 AAV를 회수하였다.
A. 회수한 바이러스를 HT10180세포에 감염시키고 48시간 후에 GFP의 발현을 확인하여 역가를 측정하였다. 또 도입된 AAV의 genome copy number는 CMV promoter 영역을 ddPCR로 확인하였다.
B. 제작된 바이러스 capsid수는 AAV2 Titration ELISA Kit (Progen)을 이용하여 측정했다. 또 GC/capsid의 비율을 계산하였다
그 결과, TransIT-VirusGEN® Reagent, VirusGEN® AAV Transfection Kit를 이용했을 때 더 많은 역가의 AAV를 생산할 수 있었고, 특히 VirusGEN® AAV Transfection Kit를 이용하였을 때 가장 많은 양의 AAV를 생산할 수 있었다.


그림 5. TransIT-VirusGEN® Reagent, VirusGEN® LV Transfection Kit - 타사 제품과의 생산효율 비교
TransIT-ViruGEN® Transfection Reagent, VirusGEN® LV Transfection Kit, A제품 3, C제품 1을 이용하여 lentivirus의 생산 능력을 비교하였다. Expi293 Expression Media (Thermo Fisher Scientific)에서 배양한 Expi293F cells (Thermo Fisher Scientific)에 plasmid set (A. pALD-Lenti EGFP-A transfer vector, pALD-VSV-G-A, pALD-Rev-A와 pALD-GagPol-A packaging vectors (DNA비율 3:0.5:0.5:2, Aldevron), B. pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP transfer vector (Millipore Sigma), ViraSafe Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, CellBio Lab) DNA비율 3:0.5:0.5:2)을 유전자 도입하고 바이러스를 회수하였다. 회수한 바이러스를 293T/17세포에 감염시키고 72시간 후에 GFP의 발현을 확인하여 역가를 측정하였다.
그 결과, TransIT-VirusGEN® Reagent, VirusGEN® LV Transfection Kit를 이용했을 때 더 많은 역가의 lentivirus를 생산할 수 있었고, 특히 VirusGEN® LV Transfection Kit를 이용하였을 때 가장 많은 양의 lentivirus를 생산할 수 있었다.
보존
그 외의 시약 : -20℃
VirusGEN® AAV Complex Formation Solution and Enhancer : 2~10℃
VirusGEN LV Enhancer, VirusGEN LV Complex Formation Solution : 2~10℃
관련제품
- 다양한 Serotype의 vector system: AAVpro® Helper Free System (AAV1, 2, 5, 6)
- CRISPR/Cas9 Vector System: AAVpro® CRISPR/Cas9 Helper Free System (AAV2)
- AAV extraction: AAVpro® Extraction Solution
- Cell에서 정제: AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
- 배양배지와 cell에서 모두 정제: AAVpro® Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)
- AAV titration: AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)
- Packaging (293T Cell Line): AAVpro® 293T Cell Line

Keyword : AAV,lentifirus,lenti,adeno associated,adeno,virus

효율증대를 위한 특수도입시약
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고역가의 AAV, Lentivirus 생산을 위한
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