닫기
TaKaRa
로그인  |   회원가입  |   ID/PW 찾기   |  제품상담문의  
제품명/제품코드
키워드검색
검색
닫기
  • 고객지원 
  • 업무안내│제품문의
  • 전화번호│02-2081-2510
  • Email     │support@takara.co.kr
  • 대전지사 
  • 업무안내│대전/충청지역 주문, 제품문의
  • 전화번호│042-828-6525
  • Email     │tkbd@takara.co.kr
  • 업무시간안내
  • [ 평  일 ] 09 : 00 ~ 18 : 00 │ [ 점심시간 ] 12 : 00 ~ 13 : 00
  • 토·일요일, 공휴일은 휴무입니다.
IVT 적용에 최적, Type IIS 제한효소

BspQ I

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
1227A
BspQ I
관련학술 구매하기
500 U
136,000원  1227A_DS.v2210Da.pdf
Takara
1227B
BspQ I
관련학술 구매하기
2,500 U
610,000원 

  • 제한효소 인식서열 일정 염기 바깥 DNA를 절단하는 Type IIS 제한효소 (Isochizomer)
  • 비대칭의 이중가닥 DNA서열 인식
  • Translation 효율을 높이기 위해 in vitro transcription시 PolyA 서열 이외에 불필요한 염기가 없는 주형 DNA를 제작할 때 활용
제품설명
BspQ I은 비대칭의 특정 이중가닥 DNA서열을 인식하여 일정 염기 바깥의 DNA를 절단하는 Type IIS 제한효소이다 (Isochizomer). in vitro transcription시, mRNA 합성을 위한 주형 plasmid에 BspQ I 인식서열을 추가한 후, BspQ I을 처리하면 PolyA 서열 이외에 불필요한 염기가 없는 mRNA를 합성할 수 있다.*1
*1 mRNA 합성을 위한 주형 DNA를 제작할 때 PolyA 서열 뒤에 추가 염기가 남는 경우 mRNA의 translation 효율이 저하되므로 염기가 남지 않도록 설계하는 것이 중요하다 (그림 1).


그림 1. Poly A 서열 뒤에 추가되는 여분의 염기 수에 따른 mRNA translation 효율 비교
3 종류의 제한효소 (BamH I, Hind III, BspQ I)로 선형화된 IVT용 plasmid로 mRNA 합성 후 TransIT®-mRNA Transfection Reagent (Code MIR 2250)를 사용해 HEK293T 세포에 transfection 하였다. 그 결과, FLuc positive control과 비교해서 23개의 추가 염기가 남아있는 mRNA는 translation 효율이 크게 저하되었다.
반면에 5개 이하의 염기가 남은 경우 모두 비슷한 translation 효율을 나타냈지만, 여분의 염기가 적을수록 mRNA의 translation 효율이 더 높은 경향을 보였다. 추가 염기가 없을 때 translation 효율이 가장 높기에 mRNA 합성을 목적으로 하는 주형 제작 시 BspQ I과 같은 Type IIS 제한 효소의 사용을 권장한다.
Hind III제한효소를 사용해 3개 이하의 잔여 염기가 남는 경우, translation 효율이 소폭 감소 되었지만 여분 염기가 없는 경우와 큰 차이를 보이지는 않는다.
용도
mRNA 합성 (in vitro transcription)에 사용되는 주형 plasmid의 선형화
내용

BspQ I (10 U/㎕)

500 U

10x BspQ I Buffer*

1 ㎖

* 본 버퍼에는 BSA가 포함되어 있지 않다.
보존 -20℃
기원
Escherichia coli carrying the plasmid containing the gene for BspQ I
일반적인 반응 조건
반응 온도
50℃*
*주의: 37℃에 반응 시 50℃보다 절단 효율이 60% 정도로 낮아진다.
주의사항
- 효소의 강한 교반은 삼가한다.
열 실활 조건
70℃, 20분
메틸화의 영향
dam methylation, dcm methylation및 CpG methylation의 영향을 받지 않는다.
Star 활성
장시간 (e.g. 4시간 이상) 반응할 때, star 활성이 생길 수 있다.
관련제품
- 한번에 200 ㎍ mRNA 합성, 고수율 in vitro transcription: Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)*
- Uncapped RNA의 5’ 말단에 Cap 0 구조를 부여하는 효소 Vaccinia Capping Enzyme (Code 2460A)
- Cap 0 구조를 가진 RNA를 Cap 1으로 만드는 효소 mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (Code 2470A)
- mRNA 전용 Transfection 시약, TransIT®-mRNA Transfection Kit (Code MIR 2250)
- 저농도 DTT에서도 안정적인 업그레이드 RNase inhibitor: Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0 (Code 2315A)
- RNA 합성 수율이 향상된 Ver.2 T7 RNA Polymerase ver.2.0 (Code 2541A)
- RNA, DNA 합성 시 PPi를 제거하여 수율을 높이는 Pyrophosphatase (inorganic) (Code 2450A)
*Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143A)에 포함된 IVT용 주형 plasmid는 BspQ I 제한효소의 인식서열이 포함되어 있지 않아 사용이 불가능하다. 이 제품을 사용할 경우에는 Hind III (Code 1060A)를 추천한다.




Keyword :