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Home > 전제품보기 > Gene transfer (virus) > Lentivirus > Provirus Quantitation Kit (Probe)
목적 세포의 유전자에 삽입된 Provirus copy number 정량

Provirus Quantitation Kit (Probe)

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 6196
 LVpro™ Provirus qPCR Quantitation Kit
관련학술 구매하기 new 		100 회
(Package) 		956,000원  6196_UM.pdf

  • Real Time PCR을 통해 provirus copy number 정량
  • Provirus copy number와 MOI의 높은 상관관계 달성
  • 실험 간의 transgene expression level 예측 가능
  • 실험 간 또는 다른 세포주 간의 형질도입 데이터 비교 및 일관된 copy number 확보
* 본 제품을 사용하기 위해서는 DNA extraction kit (매뉴얼 내 권장 제품 안내) 와 Recombinant DNase I (RNase-free) (Cat. #2270A)가 별도로 필요합니다.
제품 설명
목적세포의 nuclear DNA에 삽입된 lentivirus의 양을 정량함으로써, lentiviral supernatant stock 내에 존재하는 실제 역가 (real titer, effective titer)와 MOI (Multiplicity of infection)를 보다 정확하게 측정할 수 있다. 이를 통하여 얼마나 많은 바이러스 유전체 (viral genome)가 목적 세포에 삽입이 되었는지를 예측할 수 있다.

- LVpro™ Provirus Quantitation Kit (Code 6196)는 probe 기반의 qPCR을 이용하여 lentivirus를 통해 인간 세포로 전달될 때 유전체에 삽입되는 벡터 copy 수 (provirus copy number)를 측정한다. 본 제품은 두 종의 probes (internal control용과 provirus copy 검출용)를 포함하고 있어 정확한 provirus copy number 측정을 할 수 있다.

* 본 제품 내에 포함된 primer 및 probes는 Packaging Signal에 인접한 HIV-1 genome 영역을 증폭할 수 있도록 디자인되어 있습니다. 본 제품은 다카라바이오에서 판매하는 모든 lentivirus vector 뿐만 아니라 일반적으로 사용되는 HIV-1 based lentiviral vector에 호환 가능합니다. 만약, 사용중인 vector와의 호환성을 확인하고자 한다면, 고객지원메일 (support@takara.co.kr)로 벡터서열(.txt)을 첨부하여 문의 바랍니다.


그림 1. provirus copy numbers 와 WGS (Whole Genome Sequencing) 결과의 밀접한 상관관계.
Provirus qPCR 정량 키트를 사용하여 provirus copy number와 WGS의 밀접한 상관관계를 확인하였다. Lentivirus 벡터를 형질도입한 상염색체 이배체 세포를 클로닝하고, 추출된 genomic DNA를 전장 유전체 시퀀싱 (WGS)으로 provirus copy number를 측정하였다. 또한, 각 clone에서 추출한 genomic DNA 100ng을 사용하여 LVpro™ Provirus qPCR Quantitation Kit (Code 6196) 또는 타사 제품을 이용하여 provirus copy number를 측정한 결과, LVpro™ Provirus qPCR Quantitation Kit (Code 6196)로 측정한 provirus copy number와 WGS 분석으로 얻은 provirus copy number가 거의 동일하여 본 제품의 정량 정확도가 매우 높음을 확인하였다.


그림 2. MOI와 provirus copy 수 사이의 높은 상관관계.
(왼쪽) ZsGreen1 유전자를 포함하는 lentivirus 벡터를 다양한 MOI (Multiplicity of infection)로 HT1080 세포에 단계적으로 감염시켰다. 감염 3일 후, 세포를 DNase I으로 처리한 후 Nucleospin Tissue를 사용하여 genomic DNA를 추출하였다.
(오른쪽) CD19-CAR 유전자를 포함하는 lentivirus 벡터를 다양한 MOI로 SUP-T1 세포에 감염시켰다. 감염 3일 후, 세포를 DNase I으로 처리한 후 Nucleospin Tissue를 사용하여 genomic DNA를 추출하였으며, 각 샘플에 대해 100 ng의 genomic DNA를 사용하여 real time PCR을 수행하였다. 그 결과 세포당 평균 provirus copy 수와 MOI 간의 상관관계를 확인할 수 있었다. 또한 다양한 cell line과 다양한 carrier gene을 조합한 결과 MOI와 provirus copy 수에 대한 R2는 0.98 이상의 높은 상관관계를 보였다.
구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)
LVpro™ Provirus qPCR Quantitation Kit (Code 6196)
  • Probe qPCR Mix, with UNG (2X conc.) (625 ㎕ x 2)
  • Lentivirus Primer/Probe Mix for Provirus (10X conc.) (250 ㎕)
  • hIFNg Primer/Probe Mix for Provirus (10X conc.) (250 ㎕)
  • H2O (1 ㎖)
  • ROX Reference Dye (50X conc.) (200 ㎕)
  • ROX Reference Dye II (50X conc.) (200 ㎕)
  • Provirus Control Template (4.13 x 107 copies/㎕) (25 ㎕)
  • EASY Dilution (for Real Time PCR) (1 ㎖ x 2)
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