다카라코리아바이오메디칼

Home > 전제품보기 > Cloning 관련 > 수식효소／DNA Polymerase、RNA Polymerase > DNA Polymerase I (E. coli )

Cloned

DNA Polymerase I (E. coli )

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2130A	DNA Polymerase I (E. coli)	500 U	59,200원 ~~74,000원~~	09.01 ~ 10.31
Takara	2130B	DNA Polymerase I (E. coli)	2,500 U	333,000원

Product index

제품설명

본 효소는 주형 및 primer (DNA, RNA 모두 가능)가 존재할 때 dNTP를 기질로 주형에 상보적인 DNA를 5’→3’ 방향으로 합성한다. 또한 단일 가닥에 특이적인 3’ →5’ exonuclease 활성(proofreading)과 이중 가닥에 특이적인 5’→3’ exonuclease 활성을 가지고 있다. 이중 5’→3’ exonuclease 활성을 사용해 nick translation을 통해 DNA에 labelling을 시킬 수 있다.

보존

-20℃

농도

5 U/㎕

형상

50 mM	Potassium phosphate (pH6.5)
1 mM	DTT
50%	Glycerol

첨부 buffer 구성 (10x)

500 mM	Tris-HCl (pH7.8)
100 mM	MgCl₂
1 mM	DTT

활성의 정의

37℃, pH7.4에서 Poly d(A or T)를 주형 및 primer로 사용할 때 30분간 모든 10nmol의 nucleotide를 산성의 침전물로(acid-insoluble products) 바꾸는 효소 활성을 1 U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

67 mM	Potassium phosphate (pH7.4)
6.7 mM	MgCl₂
0.1 mM	DTT
20 μM	Poly d(A-T)
33 μM	dATP
33 μM	[³H]dTTP

사용상의 주의

- 본 효소는 희석에 의한 활성 저하가 일어나지는 않으나, 심하게 교반하면 실활할 수 있다.
- Endonuclease를 포함하고 있지 않으므로 단독으로는 nick translation 활성을 거의 보이지 않는다.
- DNA와 친화성이 강하기 때문에 과량을 사용하면 aggregation이 일어나 반응이 충분히 진행되지 않을 수 있다.

용도

- DNase I (Code 2270)과의 병용에 의한 nick translation
- Okayama-Berg법을 사용한 이중 가닥 DNA의 합성 반응 (DNA Polymerase I 0.3 ㎍은 약 2.5 U에 해당)

기원

Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Pol I

촉매하는 반응

(1) 5'→ 3' DNA polymerase활성
주형 및 primer (DNA, RNA 모두 가능)가 존재할 때 dNTP를 기질로, 주형에 상보적인 DNA를 5'→3' 방향으로 합성한다.

Polymerase 활성에 의한 반응은 아래의 3종류가 있다
- Gap filling: 이중 가닥 DNA gap의 3'-OH 말단에 nucleotide를 부가하고 남은 외가닥 부분을 채운다.
- Nick translation: 이중 가닥 DNA nick 부분의 3'-OH 말단에 nucleotide를 부가하면서 동시에 5'-말단의 nucleotide를 exonucleolytic 반응으로 제거한다.
- Strand displacement: nick 부분의 3'-OH 말단에 nucleotide를 부가함으로써 5'말단의 사슬을 치환한다.

(2) 이중 가닥 특이적 5'→ 3'exonuclease 활성

손상된 nucleotide를 제거하거나 DNA/RNA hybrid의 RNA를 분해한다.

(3) 단일 가닥 특이적 3'→ 5'exonuclease 활성

PCR에서의 fidelity에 관여하는 활성, (2) 와는 다른 도메인에 존재한다.

일반적 성질

- 분자량: 약 109,000
- Subunit
1분자당 1개의 Zn²⁺을 가진 single polypeptide chain
- 최적 pH: pH 7.4
- 보조인자: Mg²⁺
- 안정성: 격렬한 교반 과정에서 불활성화된다.
- 최적의 염 농도: 100 mM KCl

활성의 정의

Poly d(A-T)를 주형 및 primer로 사용하여 37℃, pH7.4에서 30분간 모든 10 nmol의 nucleotide를 산불용성 침전물로 바꾸는 효소 활성을 1U으로 한다.

Keyword :

수식효소／DNA Polymerase、RNA Polymerase

Cloned

DNA Polymerase I (E. coli )

Cloned

Klenow Fragment (Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)

RNA의 5’ 말단을 Cap 0 → Cap 1로 변환하는 ..

mRNA Cap 2-O-Methyltransferase

Poly(A) Polymerase

DNA, RNA 합성 반응을 촉진

Pyrophosphatase (inorganic)

Cloned

SP6 RNA Polymerase

Cloned

T4 DNA Polymerase

Cloned

T7 RNA Polymerase

RNA 합성 수율이 향상된

T7 RNA Polymerase ver.2.0

고품질 고수율 in vitro transcription을 위한 ..

Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System

Cloned

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

RNA의 5’-말단에 Cap (Cap 0)을 부가하는 효소

Vaccinia Capping Enzyme