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BAL 31 Nuclease

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
2510A
BAL 31 Nuclease
관련학술 구매하기
50 U
77,600원 
97,000원
가격할인
09.01 ~ 10.31
2510A_DS.v1901Da.pdf
Takara
2510B
BAL 31 Nuclease
관련학술 구매하기
250 U
436,500원 

제품설명
본 효소는 해양성 세균 A. espejiana BAL 31가 균체외로 생산하는 endonuclease로 단일 가닥의 DNA 또는 RNA에 특이적인 활성을 가진다 (activity I). 이 활성으로 nick이나 gap의 DNA나 RNA를 분해할 수 있다. 또한 단일 가닥 DNA 또는 RNA가 존재하지 않을 경우 exonuclease 활성으로 이중 가닥의 DNA 또는 RNA에 3’-end와 5’-end를 분해할 수 있다 (activity II). 이러한 반응의 최종 산물은 5’-ephosphate이다.
F형과 S형이 존재하며 F형은 activity II가, S형은 activity I이 더 높은 활성을 가진다. 두 활성의 비율이 다른 것 이외에 반응조건 등의 차이는 확인되지 않는다. 본 효소는 두 효소가 혼합되어 있는 형태로, F형이 더 높은 비중으로 구성되어 있다.
보존 -20℃
농도 2 U/㎕
형상

20 mM

 

Tris-HCl (pH8.0)

100 mM

 

NaCl

5 mM

 

CaCl2

5 mM

 

MgCl2

1 mM

 

EDTA

50%

 

Glycerol

첨부 buffer 조성 (2x)

40 mM

 

Tris-HCl (pH8.0)

1,200 mM

 

NaCl

24 mM

 

CaCl2

24 mM

 

MgCl2

2 mM

 

EDTA

활성의 정의
30℃, pH8.0에서 열변성 송아지 흉선 DNA를 기질로 1 분간 1 ㎍의 산성인 가용성의 DNA 단편 (acid-soluble DNA fragments)을 합성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성

20 mM

 

Tris-HCl (pH8.0)

600 mM

 

NaCl

12 mM

 

CaCl2

12 mM

 

MgCl2

1 mM

 

EDTA

650 ㎍/㎖

 

기질 DNA

사용상의 주의
- 단일 가닥 DNA endonuclease 활성은 반응 온도를 30 → 20℃로 낮추면 1/10까지 떨어지지만, 이중 가닥 DNA exonuclease 활성의 경우 1/3만이 잔존한다.
- endonuclease 활성은 염 농도에 영향을 받지 않으나 exonuclease 활성은 염 농도가 높을수록 낮아진다.
- DNA exonuclease 활성 (triming 활성)은 200 mM의 NaCl에서 최적의 염 농도 조건을 가지며, 보다 낮은 농도에서 반응하는 경우 nicking 활성을 나타내는 경우가 있다.
- Nuclease 활성은 염기 서열에 대한 의존성이 높고, GC rich 영역 (특히 Sma I 서열)의 분해가 어렵기 때문에 제한효소 사용 시 말단의 제한효소 서열을 고려할 필요가 있다.
- 활성은 희석 과정에서 효소 농도에 크게 의존적이나 희석에 대해 직선적인 상관관계를 나타내지는 않는다. 효소의 반응이 너무 강한 경우 효소의 양을 줄이기보다 반응 온도를 낮추는 것을 권장한다.
- 본 효소에 의해 생긴 평활말단 (blunt end)의 비율은 10% 정도로 낮고, ligation 효율을 높이려면 T4 DNA Polymerase (Code 2040A)에 의한 수복이 필요하다.
용도
- DNA 단편의 양 말단으로부터 부분 분해 (결실 제작)
(100~1,000 염기 정도의 결실에 적합하다. 그 이하의 경우에는 Exonuclease III (Code 2170A)S1 Nuclease (Code 2140A)의 조합을 권장한다.)
기원
Alteromonas espejiana BAL 31
일반적 성질
- 분자량: 73,000~83,000
- 최적 pH: pH8.0
- 보조인자: Ca2+
- 활성화제: Mg2+
- 저해제: EDTA (비가역적으로 불활성화)

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