| 제조사 |
제품코드 |
제품명 |
용량 |
가격
(부가세별도) |
비고 |
사용자매뉴얼 |
Takara
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2510A
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BAL 31 Nuclease
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50 U
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94,000원
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Takara
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2510B
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BAL 31 Nuclease
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250 U
|
423,000원
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농도 1~3 U/㎕
형상
| 20 mM |
Tris-HCl (pH8.0) |
| 100 mM |
NaCl |
| 5 mM |
CaCl2 |
| 5 mM |
MgCl2 |
| 1 mM |
EDTA |
| 50% |
Glycerol |
보존 -20℃
첨부 Buffer 조성 (5×)
| 40 mM |
Tris-HCl (pH8.0) |
| 1,200 mM |
NaCl |
| 24 mM |
CaCl2 |
| 24 mM |
MgCl2 |
| 2 mM |
EDTA |
기원
Alteromonas espejiana BAL31
제품설명
본 효소는 해양성 세균 A. espejiana BAL31가 균체외로 생산하는 단일가닥 DNA 특이적인 endonuclease이지만, 단일가닥 DNA가 없으면 이중가닥 DNA에 작용하여 양말단으로부터 동시에 분해하는 5’→ 3’, 3’→ 5’ exonuclease 활성(trimming 활성)을 나타낸다. 최종 산물은 5’-P mononucleotide이다. 본 효소는 분자량 약 83 kDa의〔F〕형과 분자량 약 73 kDa의〔 S〕형이 존재하며,〔 F〕형이 exo/endo의 활성의 비가 10~20배 높다. 두 형에는 exonulcease 활성이 상대적으로 다른것 이외는 반응조건 등의 차이는 확인되지 않는다. BAL31은 F형을 주로하는 S형 nuclease와의 mixture이다.
활성의 정의
열변성 송아지 흉선 DNA를 기질로 하여 30℃, pH8.0의 조건에서 1분 동안 1 ㎍의 가용성 분해물을 생성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성
| 20 mM |
Tris-HCl (pH8.0) |
| 600 mM |
NaC |
| 12 mM |
CaCl2 |
| 12 mM |
MgCl2 |
| 1 mM |
EDTA |
| 650 ㎍/ml |
기질 DNA |
사용상의 주의
- 단일가닥 DNA endonuclease 활성은 반응온도를 30 → 20℃로 낮추면 1/10 정도까지 떨어지나, dsDNA exonuclease 활성의 잔존은 1/3 정도이다.
- Endonuclease 활성은 염농도에 영향받지 않으나 exonuclease 활성은 염농도가 높을수록 저하한다.
- Trimming 활성의 최적염농도는 200 mM NaCl 부근으로 이보다 낮으면 무작위적으로 분해할 수 있다.
- 분해활성은 염기에 대한 의존성이 높고 GC-rich인 영역(특히 Sma I site)은 분해되기 어려우므로 말단의 제한효소 site를 선택할 필요가 있다.
- 반응은 distributive 효소 농도에 의존성이 높고 희석에 대해 직선적 상관은 나타내지 않으며, 효소반응이 너무 빠른 경우는 효소량을 줄이는 것보다는 반응 온도를 낮추는 것이 바람직하다.
- 본 효소에 의해 생긴 말단의 평활화율은 10% 정도로 낮고, 라이게이션 효율을 높이기 위해서는 T4 DNA polymerase에 의한 말단의 수복이 필요하다.
용도
- DNA 단편의 양말단에서의 부터의 한정분해 (결실의 제작)
(결실의 길이가1,000염기 정도가 적당하다. 그 외의 경우는 Exonuclease III와 S1 nuclease의 조합으로 하는 것이 좋다.)
Keyword :
수식효소／Nuclease、Topoisomerase
