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Cloned

Exonuclease III

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 2170A
 Exonuclease III
관련학술 구매하기 		5,000 U
 77,000원  2170A_DS.v2107Da.pdf
Takara
 2170B
 Exonuclease III
관련학술 구매하기 		25,000 U (2170A x 5)
 346,500원 

제품설명
본 효소는 이중 가닥 DNA의 3’-OH 말단에서 5’-mononucleotide를 유리시키는 3’→5’ exonuclease이다.
높은 특이성으로 이중 가닥 DNA의 평활말단 (blunt end), 3’-함몰말단 (3’-recessed end), nicking site를 분해할 수 있지만, 3’-돌출말단(3’-protruding end)는 분해하지 않는다 (사용상의 주의 참고). 그러므로 본 효소를 사용하면 서로 다른 말단 형상을 만드는 제한효소로 DNA를 double digestion한 후 한쪽 방향으로 분해하는 것이 가능하다.
최종 생성물은 단일 가닥의 상보적인 DNA와 5’-P mononucleotide이다.
본 효소는 염기 서열에 대한 특이성이 BAL 31 nuclease보다 낮다 (예를 들어 GC rich site에서 반응이 정지하는 빈도가 적어 DNA 제거에 적합하다.).
보존 -20℃
6개월 이상 장기 보관 시 -80℃ 동결 보존
농도 200 U/㎕
형상

25 mM

 

Tris-HCl (pH8.0)

50 mM

 

KCl

0.5 mM

 

DTT

50%

 

Glycerol
첨부 buffer 조성 (10x)

500 mM

 

Tris-HCl (pH8.0)

50 mM

 

MgCl2

10 mM

 

DTT
활성의 정의
37℃, pH8.0에서 제한효소를 처리한 송아지 흉선 DNA를 기질로 30 분간 1 nmol의 산성인 가용성의 분해물을(acid-soluble DNA fragments) 생성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성

50 mM

 

Tris-HCl (pH8.0)

5 mM

 

MgCl2

1 mM

 

DTT

300 μM

 

제한효소를 처리한 송아지 흉선 DNA

사용상의 주의
- 효소의 특성 상 끝부분이 3’-돌출말단(3’-protruding end)이라도 그 말단의 형상 및 배열에 따라 기질로 사용되는 경우가 있다.
  • 기질로 사용되는 것이 확인된 제한효소 절단 말단의 예
    1염기 돌출형 (Eam1105 I 등)
    2염기 돌출형 (Pvu I, Sac II 등)
    3염기 돌출형 (SfiI 등)
    4염기 돌출형 (ApaI의 절단 말단이 사용되는 것을 확인하였다. 또한 Ban II 및 BstX I도 배열에 따라서는 절단될 수 있다.)
용도
- 이중 가닥 DNA 절편의 부분 분해로 DNA polymerase의 기질이 되는 부분적인 단일 가닥 DNA 생성
(생성한 DNA는 dideoxy법에 의한 sequencing에 사용된다.)
- 단일 가닥 특이적 Nuclease(S1 혹은 Mug Bean Nuclease)와의 병용으로 DNA 절편의 결실 제작
본 효소는 이중 가닥 구조에 강한 특이성을 가지기에 제한효소의 double digestion 시 한쪽 방향만의 결손을 가지도록 제작할 수 있다. (예, EcoR I- Pst I double digestion 시 EcoR I 방향만으로 결손)
- DNA와 단백질의 상호작용 해석
- Site-directed mutagenesis
기원
Escherichia coli BE 257/pSGR 3
일반적 성질
- 분자량: 28,000
- Subunit: single polypeptide
- 최적 pH: pH8.0 (Tris-HCl)
- 보조인자: Mg2+ 또는 Mn2+를 필요로 함 (최적 농도: 5mM)
- 저해제: EDTA, Zn2+ (>90%, 10-4 M), PCMB (50 ~ 90%, 10-4 M)

Keyword :
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