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저온 및 고염 농도 조건에서 효과적인 핵산 제거

NucleoGone™ Endonuclease, Cold- and Salt-active

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2491A	NucleoGone™ Endonuclease, Cold- and Salt-active	25 KU	309,000원

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Crude cell 추출액에 포함된 다양한 DNA 및 RNA를 제거
저온 및 고염 (high salt) 조건에서 높은 활성
바이러스 벡터 정제 시 host cell 유래 핵산 제거
샘플 내 핵산을 분해하여 점도를 감소시키고 정제 단백질의 수율 향상

제품설명

본 제품은 모든 형태의 DNA와 RNA (single-stranded, double-stranded, linear, and circular)를 효율적으로 분해하는 non-selective endonuclease이다. 이 효소는 일반적인 non-selective endonuclease (예: NucleoGone™ Endonuclease (Code 2490A))에 비해, 염 농도가 높거나 (300 mM 이상) 상대적으로 낮은 온도 (4~37℃)에서 높은 반응성을 나타낸다. 이러한 특성은 AAV 벡터 제조 공정 등에서 생산성 향상을 위해, cell lysis는 촉진하고 바이러스 입자의 응집은 막아야하는 고염 조건과 낮은 온도에서 장시간 반응이 필요한 경우에 적합하다.

(A)

(B)

그림 1. 고염 및 낮은 온도 조건에서 효소 활성
본 제품과 기존 제품 (NucleoGone™ Endonuclease (Code 2490A))의 활성을 활성 측정 반응계 (25 mM Tris-HCl (pH 8.5), 5 mM MgCl₂, 500 mM NaCl, 및 0.5 mg/㎖ 송아지 흉선 DNA를 37 ℃에서 30분 동안 반응)를 기본으로 하여, NaCl 농도와 반응 온도만을 변경하여 측정하였다. 두 제품 각각에 대해 얻어진 최대 활성 값을 100%로 표시하였다.

(A) 염 농도에 따른 효소 활성 평가
기존 제품은 NaCl 농도가 증가함에 따라 활성이 감소하는 경향을 보이는 반면, 본 제품은 NaCl 농도가 증가함에 따라 활성이 증가하여 750 mM에서 최대 활성을 나타내었다. 이를 통해, 본 제품이 고염 농도 조건 (300 mM 초과)에서 핵산 분해에 적합한 효소임을 확인하였다.

(B) 반응 온도에 따른 효소 활성 평가
본 제품은 37 ℃ 이하의 저온 조건에서 최적 온도 (37～45℃)로부터의 활성 감소 폭이 기존 제품에 비해 작았다. 이를 통해, 저온 조건이 요구되는 시료에서도 안정적인 핵산 분해 활성을 유지할 수 있음을 확인하였다.

(A)

(B)

그림 2. 효소 유닛 (Unit) 특성
본 제품과 타사 salt-tolerant nuclease의 활성을 비교하기 위해, 활성 측정 반응계 (25 mM Tris-HCl (pH 8.5), 5 mM MgCl₂, 500 mM NaCl, 0.5 mg/㎖ 송아지 흉선 DNA를 37 ℃에서 30분 동안 반응)를 기본으로 NaCl 농도와 반응 온도만을 변경하여 활성을 측정하였다. 각 조건에서 표시된 1 unit당 실제 측정된 단위량을 계산하여 비교하였다.
그 결과, 본 제품은 타사 제품에 비해 (A) NaCl 농도 및 (B) 온도 변화 조건 각각에서 더 높은 활성을 나타내었다. 동일한 unit을 사용한 조건에서 본 제품이 더 우수한 핵산 분해 능력을 가지는 것이 확인되었다. (자사 실험 데이터)

용도

AAV 등 바이러스 벡터 정제 공정에서 host cell 유래 핵산 (genomic DNA 또는 RNA) 제거
단백질 정제시 cell lysate의 점도 감소^*1
샘플에 혼입된 핵산 제거

^*1 본 효소는His-tag을 가지고 있어, His-tagged단백질 정제 시 주의 필요

보관온도

－20 ℃

기원

Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the gene for NucleoGone™ Endonuclease, Cold- and Salt-active

일반적 특성

분자량: 약 26 kDa

활성의 정의

500 mM NaCl 조건에서 송아지 흉선 DNA를 기질로 37℃에서 30분 동안 반응하여, 반응액의 260 nm 흡광도를 1.0 변화시키는 효소량을 1 U으로 정의

비활성화 조건

이 효소를 완전히 불활성화하기 위하여, NaOH를 100 mM가 되도록 추가한 후 70 ℃에서 30분간 가열

활성 측정용 반응액 조성

25 mM	Tris-HCl, pH 8.5
5 mM	MgCl₂
500 mM	NaCl
0.5 mg/㎖	송아지 흉선 DNA

품질 관리 데이터

성능 테스트 결과는 각 lot의 CoA (Certificate of Analysis) 참고

최적 조건 반응 조건

이 제품은 다음과 같은 조건에서 활성을 유지

조건	최적 조건	반응 조건
Temperature	37～45℃	4～55℃
pH	8.5～10	7～10
Na⁺, K⁺ ions^*2	500～1,000 mM	0～1,000 mM
EDTA	＜1 mM	0～2.5 mM
DTT	0～2.5 mM	0～200 mM
2-mercaptoethanol	0～2.5 mM	0～400 mM
Triton X-100	0～0.2％	0～1％

^*2 염 농도가 200 mM 이하인 경우, NucleoGone™ Endonuclease (Code 2490A)의 사용을 권장한다.