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Cloned

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2230A	Terminal Deoxynucleotidyl Transferase	300 U	85,000원
Takara	2230B	Terminal Deoxynucleotidyl Transferase	1,500 U (2230A x 5)	382,500원

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그 외 (유전공학 관련)

제품설명

본 효소는 주형 없이 단일 가닥 또는 이중 가닥의 DNA 3’-OH말단에 deoxynucleotide를 중합하는 반응을 촉매 한다. 이때 primer로 최소 3염기 이상의 deoxynucleotide를 필요로 한다.
TdT를 이용한 단일 중합체의 부가 반응의 조건은
   1. 부가하는 염기의 종류 (dATP, dTTP, dCTP, dGTP)
   2. 버퍼에 있는 2가 이온의 종류 (Mn²⁺, Co²⁺, Mg²⁺)
   3. 부가되는 DNA의 말단구조 (돌출 3’-OH 말단, 평활 말단, 함몰 3’-OH 말단)
등에 영향을 받기 때문에 상황에 맞는 최적조건을 검토할 것을 추천한다.

보존

-20℃

기원

E. coli carrying the plasmid which encodes the gene of terminal deoxynucleotidyl transferase

농도

14 U/㎕

형상

60 mM	Potassium Phosphate 완충용액 (pH7.2)
150 mM	KCl
1 mM	DTT
50%	Glycerol

첨부 buffer 조성 (5x)

(Tailing 반응용)

500 mM	HEPES (pH7.2)
40 mM	MgCl₂
0.5 mM	DTT
0.1%	BSA [별첨]

활성의 정의

37℃, pH7.2에서 DNase 처리 후 열 변성 송아지 흉선 DNA (활성화 송아지 흉선 DNA)를 initiator로 1시간 동안 1 nmol의 [³H]dATP를 산성의 침전물을(acid-insoluble products) 합성하는 효소활성을 1 U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

100 mM	Sodium cacodylate 완충용액 (pH7.2)
8 mM	MgCl₂
0.1 mM	DTT
0.024%	BSA
160 ㎍/㎖	활성화 송아지 흉선 DNA
0.5 mM	[³H]dATP

사용상의 주의

TdT를 이용한 단일 중합체의 부가 반응의 조건은 부가하는 염기의 종류 (dATP, dTTP, dCTP, dGTP), buffer 안의 2가 이온의 종류 (Mn²⁺, Co²⁺, Mg²⁺) 및 부가되는 DNA의 말단구조 (3’-OH 돌출 말단, 평활 말단, 3’-OH 함몰 말단)등에 영향을 받기 때문에 상황에 맞는 최적 조건을 찾아야 한다. 일반적으로 dATP, dTTP를 부가하는 경우 Co²⁺을 포함하는 buffer가, dCTP, dGTP를 부가하는 경우 Mn²⁺를 포함한 buffer가 최적이다. 또한 DNA의 3’-OH 말단에 15~40 base의 deoxynucleotide를 부가하기 위한 dNTP와 DNA의 최적 조건은 20 : 1의 몰수이고, 3’-OH 함몰 말단의 경우 100:1의 몰수이다.

CoCl₂ 버퍼

100 mM	Sodium cacodylate (pH7.2)
1 mM	CoCl₂
0.1 mM	DTT

MnCl₂ 버퍼

100 mM	Sodium cacodylate (pH7.2)
2 mM	MnCl₂
0.1 mM	DTT

용도

- dNTP 표식 혹은 ddNTP에 의한 DNA의 3’-말단 표식
- Okayama-Berg법에 의한 벡터 cDNA에 상보적인 단일 중합체 부가

일반적 성질

- 분자량: 약 60,000 (유전자를 통한 추정)
- 최적 pH: pH7.2
- 보조인자: Mg²⁺, Mn²⁺, Co²⁺ 등의 2가 이온 중 하나를 필요로 한다.
- 저해제: 다량의 양이온 혹은 음이온에 저해된다.
- 기타
Nucleotide analog (5-methyl-dCTP, 6-O-methyl-dGTP 등)도 기질로 사용할 수 있다.
Deoxythymidine 3인산 혹은 cordycepin 3인산은 터미네이터로 사용할 수 있다.

Keyword :

수식효소／DNA Polymerase、RNA Polymerase

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