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탈인산화효소

Alkaline Phosphatase (Calf intestine) (CIAP)

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2250A	Alkaline Phosphatase (Calf intestine)	1,000 U	72,000원 ~~90,000원~~	09.02 ~ 10.31
Takara	2250B	Alkaline Phosphatase (Calf intestine)	5,000 U (2250A x 5)	405,000원

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제품설명

본 효소는 대장균 유래의 효소와 마찬가지로 대부분의 인산 monoester 결합을 분해하지만, 인산 diester와 인산 triester 결합은 분해하지 않는다. 또한 ATP 등의 pyrophosphate 결합의 분해속도가 느리다.

보존

-20℃

농도

30 U/㎕

형상

10 mM		Tris-HCl (pH8.0)
50 mM		KCl
1 mM		MgCl₂
0.1 mM		ZnCl₂
50%		Glycerol

첨부 buffer 구성 (10x)

500 mM		Tris-HCl (pH9.0)
10 mM		MgCl₂

활성의 정의

37℃, pH9.8에서 1분간 1 μmol의 p-nitrophenol을 유리시키는 효소활성을 1 U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

1 M		Diethanolamine (pH9.8)
0.5 mM		MgCl₂
15 mM		p-nitrophenyl phosphate

사용상의 주의

본 효소는 보존 조건에서 매우 안정하지만 chelate가 존재할 때 65 ℃, 30분의 열처리로 99% 이상의 활성이 비가역적으로 실활된다.
단, 사용 조건에 따라서는 충분하지 않을 수 있으므로, gel extraction 또는 phenol-chloroform 정제를 통해 완전히 불활성화시키는 것을 추천한다.

용도

- DNA의 5’-말단 표지를 위한 전 처리, 또는 선형화된 vector의 self ligation 방지를 위한 탈인산화(dephosphorylation)
- 평활말단 (blunt end) 또는 3’-돌출말단 (3’-overhang)의 탈인산화에는 Alkaline Phosphatase (E. coli C75) (Code 2120A)을 이용한 고온 (55℃~60℃)에서의 반응이 바람직하다.

기원

Yeast carrying the plasmid which encodes the gene of calf intestine alkaline phosphatase

일반적 성질

- 분자량: 약 100,000
- Subunit: 분자량 약 50,000의 Zn²⁺을 포함한 2개의 당단백질
- 최적 pH
   pH10 부근 (높은 기질 농도)
   pH8 부근 (낮은 기질 농도)
- 활성화제
   Tris등 알코올 화합물, Mg²⁺
- 안정성
   매우 안정
    65℃, 30분의 열처리로 가역적으로 불활성화한다. 완전히 불활성화시키기 위해서는 페놀 처리가 필요하다.