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Long strand DNA도 methylated DNA도 OK！고효율 Competent Cell

E. coli Competent Cells (Takara Bio 제품)

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	9051	E. coli HB101 Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	207,000원
Takara	9052	E. coli JM109 Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	207,000원
Takara	9053	E. coli CJ236 Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	227,000원
Takara	9054	E. coli BMH71-18 mutS Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	227,000원		,
Takara	9055	E. coli MV1184 Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	227,000원
Takara	9057	E. coli DH5α Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	207,000원
Takara	9127	E. coli HST02 Competent Cells	1 Set (100 μl×10)		종매일 :2018.08.06
Takara	9128	E. coli HST08 Premium Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	239,000원
Takara	9129	E. coli HST04 dam－/dcm－ Competent Cells	1 Set (100 μl×10)	236,000원

보존 -80℃

제품설명

Mandel과 Higa에 의한 대장균의 형질전환법의 확립은 재조합 DNA 실험의 중요한 기초가 되었다. 대장균을 Ca²⁺ 이온 존재 하에 놓아두면 외래 DNA (plasmid, phage DNA 등)를 세포 안으로 도입할 수 있는 "competent"상태가 되고 이 세포를 competent cell이라 한다.
재조합 DNA 실험에서는 competent cell을 사용한 형질전환, 형질도입 등을 번번하게 실시하나 효율이 높고 재현성이 좋은 competent cell을 제조하는 것은 쉽지 않다. 유전자 library 제작, 재조합 plasmid 제작이나 서브클로닝 등 목적으로 하는 유전자양이 적은 경우에는 도입 효율이 높은 competent cell을 사용하는 것이 중요하다.
다카라에서는 Hanahan의 방법을 개량한 새로운 방법으로 형질전환 효율이 높은 10종류의 Competent Cells E. coli HST08 Premium, HST04 dam－/dcm－, HB101, JM109, DH5α, CJ236, BMH71-18 mutS, MV1184, TH2, HST02 (모두 EK1계의 숙주 대장균임)를 제조· 판매하고 있다.

*메틸화 DNA의 클로닝, cDNA library, genome DNA library 제작부터 일반적인 cloning까지 폭넓게 적용하는 E. coli HST08 Premium Competent Cells (Code 9128) 자세히 보기

균주 특징

고효율 α-상보성 선택 숙주 E. coli HST08 Premium
E. coli HST08 Premium는 외래의 메틸화된 DNA를 절단하는 유전자군 mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA이 결손되어 있다. 매우 높은 형질 전환 능력을 가지고 있기 때문에 메틸화된 DNA의 클로닝부터 유전자 라이브러리의 제작, 서브 클로닝 등에 이르기까지 폭넓은 용도에 사용할 수 있다. 큰 사이즈의 plasmid DNA의 형질 전환도 높은 효율로 가능하고, 같은 유전자형을 가지는 다른 competent cells보다 colony 형성 속도도 빠르기 때문에, TaKaRa DNA Ligation Kit LONG(Code 6024)과 같이 사용하면, 10 kb이상의 DNA의 클로닝, 라이브러리 제작등을 보다 쉽게 할 수 있다. pUC계 plasmid를 이용한 형질 전환 시에는, β-galatosidase의 α-상보성을 이용해, X-Gal 첨가에 의한 재조합체의 선별이 쉽다. F-이기 때문에, BAC, fosmid vetctor에도 사용 가능하다.

dam, dcm 결손 숙주 E. coli HST04 dam-/dcm-
E. coli HST04 dam^-/dcm^-는 본래 대장균이 가지고 있는 메틸화 유전자 dam, dcm이 결손되어 있으므로, DNA가 대장균에 의해 메틸화되지 않는다. 본 제품으로 조제된 plasmid는 dam 또는 dcm methylase의 영향을 받는 제한효소로 절단가능하다. 또한, dam, recA의 2중 변이 숙주는 살아남을 수 없기 때문에, 본 숙주는 recA⁺주로 제작되었다. 그러므로, 반복서열을 갖고 있는 외래 DNA는 recA 유전자에 의해 재조합이 일어날 가능성이 있다. 본 제품은 클로닝용 숙주로는 적합하지 않으며, 형질전환시에는, 미리 구축된 plasmid를 추천한다.

고효율 범용 숙주 E. coli HB101
E. coli HB101은 재조합 DNA 실험의 초기부터 널리 사용 되어온 균주로 유전형질이 안정적이고 사용이 용이하여 형질전환 실험 목적에 적당하다. α- 상보성 선택 숙주 E. coli JM109 E. coli JM109는 pUC계 plasmid vector의 형질전환이나 M13 phage vector DNA의 형질도입하는 경우, vector로부터 발현하는 lacZ α peptide와 JM109F′가 코드하는 lacZ△M15에 의한 β-galactosidase의 활성회복 (α-상보성)을 이용함으로써 재조합체의 선별이 간편한 균주이다. F′ plasmid를 갖고 있기 때문에 유전자 library 제작이나 서브클로닝 이외에 M13 vector DNA의 숙주로써 ssDNA의 제조에도 사용할 수 있다.

α- 상보성 선택 숙주 E. coli DH5α
pUC계 plasmid를 이용한 유전자 library 제작, 서브클로닝 등을 하는 경우, 본 숙주균과 조합하면 β-galactosidase의 α-상보성을 이용하여 X-Gal에 의해 재조합체를 쉽게 선별할 수
있다. deoR 변이에 의해 크기가 큰 plasmid의 도입이 가능하다.

부위 특이적 변이 처리용 ssDNA 제조 숙주 E. coli CJ236
E. coli CJ236은 dut, ung 변이주의 대장균으로 dUTPase (Dut)와 Uracil-DNA glycosylase (UNG)가 결손되어 있어 DNA 중 Thymine (T)의 일부가 deoxyuracil (dU)로 치환된 DNA를 합성한다. Kunkel법은 이와 같은 대장균을 이용하여 site-directed mutagenesis를 실시하는 방법으로, 변이시키고자 하는 유전자를 pUC118/119, M13 phage 등의 vector에 클로닝하여 CJ236을 숙주로 이용하여 ssDNA를 조제하므로써 Kunkel법으로 사용할 수 있는 deoxyuracil 함유하는 DNA를 얻을 수 있다. F′ plasmid (pCJ105)는 chloramphenicol 내성 유전자를 갖고 있기 때문에 chloramphenicol 존재하에 안정하게 보호, 유지된다.

부위 특이적 변이처리 유전자 고정 증폭 숙주 E. coli BMH71-18 mutS
E. coli BMH71-18 mutS는 mutS 균주로 DNA mismatch의 복구시키는 능력이 저하되어 있다. 따라서 site-directed mutagenesis를 실시할 때 BMH71-18 mutS를 숙주균으로 사용하면 변이 도입부분의 수복을 억제하기 때문에 도입하고자 하는 변이를 고정하기 쉬워 변이 도입 효율이 상승한다.

Amber 변이 선택용 한가닥 ssDNA 제조용 숙주 E. coli MV1184
E. coli MV1184는 amber suppressor free 균주로 amber 변이 DNA 선별에 이용하거나 Mutan-Super Express Km (Code RR022) 등에 의해 변이를 도입할 경우, 변이가 도입된 DNA를 선별하기 위해 이용한다. 또 F、 plasmid를 가지기 때문에 M13 phage vector나 phagemid vector의 숙주로 ssDNA의 조제에도 이용할 수 있다.

Enforcement Cloning System용 숙주 E. coli TH2
E. coli TH2는 supE^-, trpR^-, rpsL^- 균주로 trp promoter의 하류에 amber변이를 갖는 치사 유전자 rpsL을 코드하는 Enforcement Cloning System용 vector pKF3 DNA를 사용하여 외래 유전자의 삽입 유무를 streptomycin 첨가 배지에서의 생육으로 간편하게 판별 가능한 숙주이다.

α- 상보성 선택 숙주 E. coli HST02
E. coli HST02는 외래의 메틸화된 DNA를 절단하는 유전자군 Δ(mrrmcrBC-hsdRMS), mcrA를 완전히 결실시켜 유전자 library 제작, 서브클로닝에 폭넓게 사용할 수 있다. 또한 F、 plasmid를 가지고 있어 M13 vector DNA의 숙주로 이용할 수 있다. pUC계 plasmid 형질전환, M13 phage vector DNA 형질도입시에는 β-galactosidase의 α-상보성을 이용하여 XGal, IPTG에 의해 재조합체 선별이 가능하다.

Genotype

Strain	Genotype
E. coli HST08 Premium	F^-, endA1, supE44, thi-1, recA1, relA1, gyrA96, phoA, Φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF)U169, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC), ΔmcrA, λ^-
E. coli HST04 dam－/dcm－	F^-, ara, Δ(lac-proAB)[Φ80dlacZΔM15], rpsL (str), thi, Δ(mrr-hsdRMSmcrBC), ΔmcrA, dam, dcm
E. coli HB101	F-, hsdS20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20 (str), xyl-5, mtl-1, supE44, leuB6, thi-1
E. coli JM109	recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17 (rK^-, mK^-), e14^- (mcrA^-), supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F’ 〔traD36, proAB⁺, lacI^q, lacZΔM15〕
E. coli DH5α	F^-, Φ80dlacZΔM15, ^Δ(lacZYA-argF) U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17 (rK^-, mK⁺), phoA, supE44, λ^-, thi-1, gyrA96, relA1
E. coli CJ236	dut1, ung1, thi-1, relA1/pCJ105 (F’ camr)
E. coli BMH71-18 mutS	Δ(lac-proAB), supE, thi-1, mutS215：：Tn10(tet^r)/F’[traD36, proAB⁺, lac I ^q, lacZΔM15]
E. coli MV1184	ara, Δ(lac-proAB), rpsL, thi (Φ80 lacZΔM15), Δ(srl-recA)306:Tn10 (tet^r)/F’〔traD36, proAB^＋, lac I^q, lacZΔM15〕
E. coli TH2	supE44, hsdS20 (r_B^-, m_B^-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, thi-1, trpR624
E. coli HST02	F’ [traD36, proA⁺B⁺, lac I^q, lacZΔM15]/Δ(lac-proAB), recA, endA, gyrA96, thi, e14^- (mcrA^-), supE44, relA, ΔdeoR, Δ(mrr-hsdRMSmcrBC)

품질

형질전환 효율

1 ng의 plasmid DNA를 형질전환한 경우

100 ㎕ E. coli HST08 Premium Competent Cells/1 ng pUC19 plasmid

＞1×10⁸ transformants/1 ㎍ pUC19 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli HST04 dam－/dcm－ Competent Cells/1 ng pUC19 plasmid

＞1×10⁶ transformants/1 ㎍ pUC19 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli HB101 Competent Cells/1 ng pBR322 plasmid

＞1×10⁸ transformants/1 ㎍ pBR322 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli JM109 Competent Cells/1 ng pBR322 plasmid

＞1×10⁸ transformants/1 ㎍ pBR322 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli DH5α Competent Cells/1 ng pUC19 plasmid

＞1×10⁸ transformants/1 ㎍ pUC19 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli CJ236 Competent Cells/1 ng pUC119 plasmid

＞1×10⁷ transformants/1 ㎍ pUC119 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli BMH71-18 mutS Competent Cells/1 ng pUC119 plasmid

＞1×10⁷ transformants/1 ㎍ pUC119 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli MV1184 Competent Cells/1 ng pUC119 plasmid

＞1×10⁷ transformants/1 ㎍ pUC119 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli TH2 Competent Cells/1 ng pBR322 plasmid

＞1×10⁷ transformants/1 ㎍ pBR322 plasmid DNA

100 ㎕ E. coli HST02 Competent Cells/1 ng pUC19 plasmid

＞1×10⁸ transformants/1 ㎍ pUC19 plasmid DNA

Keyword :

Competent Cells & Electro-Cells


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