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Ribonuclease Inhibitor

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2311A	Ribonuclease Inhibitor (Porcine liver)	5,000 U	96,000원 ~~120,000원~~	09.01 ~ 10.31
Takara	2311B	Ribonuclease Inhibitor (Porcine liver)	25,000 U	540,000원

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- RNase-free Water
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제품설명

이 제품은 돼지의 간에서 RNase A가 고정된 컬럼으로 affinity chromatography를 진행해 정제한 RNase inhibitor이다. 이는 인간 태반에서 직접 정제한 RNase inhibitor와 매우 유사한 성질을 가지며, RNase A와 1:1 복합체를 형성하여 RNase의 작용을 강하게 억제한다 (Ki=4x10^-10 M).

이러한 반응은 가역적이므로, urea 또는 sulfhydryl 시약으로 복합체를 해리 시킴으로써 RNase의 활성을 되살리고, Inhibitor를 비가역적으로 실활 시킬 수 있다. 또한, 기존의 길항성 저해제 (nucleotide류, 무기인산류)와는 달리 단백질이므로 페놀 처리로 반응계에서 간단히 제거할 수 있다. 반면 RNase H의 활성은 저해하지 않는다.

이 제품은 인간 태반에서 유래한 RNase와 동일한 용도로 사용 가능하며 human DNA 오염이 우려되는 경우 유용하게 사용할 수 있다.

보존 -20℃

농도 40 U/㎕

형상

20 mM		HEPES-KOH (pH 7.5)
50 mM		KCl
5 mM		DTT
50 %		Glycerol

활성의 정의

5 ng의 RNase A 활성을 50% 저해하는 활성을 1 U으로 한다.
(저해 활성은 RNase A에 의한 Cyclic 2’, 3’-CMP의 가수분해를 억제하는 능력에 의해 정량 되었다.)

사용상의 주의

- 넓은 pH 범위에서 저해 활성을 보이며 pH7~8에서 최고활성을 보인다.

용도

- cDNA 합성 시 (RNase inhibitor, 0.5 U/㎕ reaction)
- in vitro translation (RNase inhibitor, 1 U/㎕ reaction)
- in vitro transcription with cell-free extract (RNase inhibitor, 20 U/㎕ reaction)
- in vitro transcription with SP6 or T7 polymerase (RNase inhibitor, 1 U/㎕ reaction)
- Polysome isolation (RNase Inhibitor, 1,000 U/㎖ reaction)

기원

- 돼지 간

일반적인 성질

- 분자량: 약 52,000 Da
- 소단위: single polypeptide
- 최적 pH: pH5~8 (최대 저해 활성은 pH7~8)
- 활성화제
환원제 DTT
free 상태의 -SH기를 보호하기 위해서 storage buffer에 최소 1mM의 DTT가 필요하다.
장기간 보존하는 경우 5mM의 DTT가 필요하다.
- 저해제
p-hydroxymercuribenzoate
N-ethylmaleimide
- 안정성
활성을 유지하기 위해서는 free 상태의 -SH기가 필요하다.
기포 혹은 강한 충격 (강한 교반 등)에 의해 효소가 비활성화 될 수 있다.

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Keyword :

Reverse Transcription (Takara)

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