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Home > 전제품보기 > cDNA 합성 > Reverse Transcription (Takara) > PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
Premix 타입의 cDNA 합성 시약

PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
6215A
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
관련학술 구매하기 라이선스 
50 회 (20 ㎕ 반응계)
354,400원 
443,000원
가격할인
03.02 ~ 04.30
6215A_e.v1910Da.pdf
Takara
6215B
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
관련학술 구매하기 라이선스 
200 회 (20 ㎕ 반응계)
1,594,800원 



  • 1st strand cDNA 합성에 필요한 모든 시약이 포함된 premix 시약
  • RNA denaturation 불필요 - RNA 첨가 후 바로 RT 반응 시작
  • 10~20분의 역전사반응으로 long fragment (13 kb) RNA 역전사 가능
  • RTase의 내열성 증가로 필요 시 고온 (55 ℃)에서 반응 진행
제품설명
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix는 total RNA 또는 polyA+ RNA에서 1st strand cDNA를 합성하기 위한 제품이다. 1st strand cDNA 합성에 필요한 역전사효소 PrimeScript™ IV RTase, RNase Inhibitor, Oligo dT primer, dNTP mixture 및 반응 buffer가 premix되어 template RNA와 D.W를 첨가하는 것 만으로 쉽고 빠르게 실험을 진행할 수 있다.
신규 역전사 효소인 PrimeScript™ IV RTase는 기존 제품보다 짧은 시간에 cDNA를 합성할 수 있고, 내열성도 향상되어 gene specific primer를 사용시 보다 높은 온도에서 고효율로 특이성 높게 cDNA를 합성할 수 있다.
본 제품으로 합성된 1st strand cDNA는 2nd strand 합성, hybridization, PCR 증폭, full length cDNA library 제작 등 고품질의 full length cDNA가 필요한 후속실험에 적합하다. 또한 제품 내에 구성되어 있는 Random 6 mers를 사용하여 polyA+를 포함하지 않는 total RNA의 cDNA 합성이나 발현해석에 적합한 Real Time PCR용 cDNA를 합성할 수도 있다.
내용 (Code 6215A, 20 ㎕ 반응 시 50회 분량)

1.

5× PrimeScript™ IV cDNA Synthesis Mix *1

200 ㎕

2.

Random 6 mers (50 μM) *2

100 ㎕

3.

RNase Free dH2O

1 ㎖× 2

*1 PrimeScript™ IV RTase, RNase Inhibitor, Oligo dT Primer, dNTP Mixture 및 반응 buffer (Mg2+ 함유)을 포함한다.
*2 polyA+을 포함하지 않는 RNA의 cDNA 합성 또는 Real Time PCR용 cDNA 합성, RNA의 전 영역을 고루 cDNA합성하는 경우에 반응 mixture에 첨가한다.
보존 -20℃
적용 예 - 1st strand cDNA 합성
1. 아래의 mixture를 얼음위에서 조제한다.

시약

사용량

5× PrimeScript™ IV cDNA Synthesis Mix *1

4 ㎕

Random 6 mers (50 μM) *2

≤ 2 ㎕*1*2

Template RNA

total RNA: ≤ 5 ㎍
polyA+ RNA: ≤ 1 ㎍

RNase Free dH2O

X ㎕

Total 20 ㎕


2. 가볍게 섞은 다음, 아래의 조건에서 반응한다.
30℃ 10분 (Random 6 mers 사용시에만 추가)
42℃ 10~20분 *3


3. 95℃, 5분 또는 70℃, 15분에서 효소를 불활성화시킨 후 얼음 위에서 냉각한다. *4

*1 2 kb 미만의 cDNA를 합성하는 경우는 1~2 ㎕, 2 kb이상의 cDNA을 합성하는 경우는 0.4~1 ㎕의 Random 6 mers를 반응용액에
   첨가할 것을 추천합니다. Random 6 mers 첨가시에는 RT 반응 전에 30℃, 10분의 preheat 과정을 추가합니다.
*2 Gene Specific Primer를 사용하는 경우, 최종 농도 0.1 μM이 되도록 반응 용액에 첨가하세요.
*3 PrimeScript IV RTase는 고차 구조에도 강한 신장성을 나타내므로, 일반적인 반응은 42℃를 권장합니다.
   다만, 복잡한 고차 구조를 가진 RNA에서 cDNA을 합성하는 경우나 역전사 반응에 Gene Specific Primer를 사용하는 경우에는 역전사 반응
   온도를 45~55℃로 높여 cDNA 합성효율을 개선할 수 있습니다.
*4 Long fragment cDNA을 증폭할 경우 cDNA에 대한 damage를 줄이기 위해 70℃, 15분으로 불활성화 하세요.

Keyword :

Reverse Transcription (Takara)
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