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Double strand cDNA 합성

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
6111A
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
관련학술 구매하기
10 rxns
1,043,000원  6111A_e.v1811Da.pdf

제품설명
본 제품은 주로 동.식물성 polyA+ RNA부터 두 가닥 cDNA를 합성하기 위한 키트이다.
본 키트의 구축은 Gubler-Hoffman의 방법1)에 기초한다. 시스템 원리는 이하 그림 참조(그림 1,2참조).
  • PrimeScript RTase와 Oligo(dT)18 Primer 또는 Random Primer를 이용해 1st strand cDNA를 합성한다.
  • E. coli RNase H로 mRNA-cDNA hybrid의 RNA에 nick을 넣고, E. coli DNA Polymerase I과 E. coli DNA Ligase의 시스템에 의해 RNA를 DNA로 교체하면서 2nd strand DNA를 합성한다.
  • T4 DNA Polymerase로 말단의 평활화를 실시한다.
내용 (10 회)

PrimeScript RTase(200 U/μl)

10 μl

RNase Inhibitor(40 U/μl)

10 μl

Oligo (dT)18 Primer(1μg/μl)

20 μl

Random Primer(9 mer)(0.3μg/μl)

20 μl

5×1st Strand Synthesis Buffer

40 μl

dNTP Mixture(각 10 mM)

40 μl

E. coli RNase H / E. coli DNA Ligase Mixture

20 μl

E. coli DNA Polymerase I(20 U/μl)

20 μl

5×2nd Strand Synthesis Buffer

300 μl

T4 DNA Polymerase(1 U/μl)

40 μl

RNase free dH2O

600 μl×2

Control RNA(1μg/μl)*

5 μl



* 본 키트에 첨부된 Control RNA는 SP6 promoter영역의 하류에 pBR322 유래의 테트라사이클린 내성유전자를 포함 약 1.4 kb의 단편을 삽입한 plasmid pSP Tet3을 template에 SP6 RNA Polymerase를 사용하여 in vitro transcription에 의해 합성한 것이다. 이 Control RNA는 30개의 adenine염기로 된 polyA+ tail을 가진 약 1.4 kb의 polyA+ RNA로 이 RNA를 주형에 두 가닥 cDNA를 합성해 적절한 plasmid에 삽입했을 때 이 두가닥 cDNA가 full-length의 것이라면, 이 plasmid는 테트라사이클린 내성이다.
보존
- 20℃
cDNA합성의 원리


그림 1. Oligo(dT)18 Primer를 이용한 두 가닥 cDNA합성 반응



그림 2. Random Primer를 이용한 두 가닥 cDNA합성 반응

Keyword : 6130

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