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Double strand cDNA 합성

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
6111A
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
관련학술 구매하기
10 rxns
834,400원 
1,043,000원
가격할인
09.01 ~ 10.31
6111A_e.v1811Da.pdf

제품설명
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit는 Gubler-Hoffman 방법을 사용하여 동/식물의 poly A+ RNA부터 이중 가닥 cDNA를 합성하기 위한 제품이다. 그림 1 또는 그림 2의 방법으로 합성된 이중 가닥 cDNA는 cDNA library를 제작하기 위해 vector로 cloning 할 수 있다.
내용 (10 회 분량)

PrimeScript RTase (200 U/㎕)

10 ㎕

RNase Inhibitor (40 U/㎕)

10 ㎕

Oligo (dT)18 Primer (1 ㎍/㎕)

20 ㎕

Random Primer(9 mer) (0.3 ㎍/㎕)

20 ㎕

5X 1st Strand Synthesis Buffer

40 ㎕

dNTP Mixture (각 10 mM)

40 ㎕

E. coli RNase H / E. coli DNA Ligase Mixture

20 ㎕

E. coli DNA Polymerase I (20 U/㎕)

20 ㎕

5X 2nd Strand Synthesis Buffer

300 ㎕

T4 DNA Polymerase (1 U/㎕)

40 ㎕

RNase free dH2O

600 ㎕×2

Control RNA (1 ㎍/㎕)*

5 ㎕


* Control RNA는 positive control로 사용할 수 있는 1.4 kb poly A+의 RNA이며 tetracycline 저항성 유전자를 가지고 있다. 이 RNA를 주형으로 full-length의 이중 가닥 cDNA를 합성한 후 cloning을 하면 해당 plasmid는 세포에 tetracycline 저항성을 부여한다.
보존
- 20℃
이중 가닥 cDNA 합성 원리
1. PrimeScript RTase와 Oligo(dT)18 Primer 또는 Random Primer를 이용해 1st strand cDNA를 합성한다.
2. coli RNase H로 mRNA-cDNA hybrid의 RNA에 nick을 형성하고, E. coli DNA Polymerase I과 E. coli DNA Ligase의 시스템에 의해 RNA를 DNA로 교체하면서 이중 가닥 cDNA를 합성한다.
3. T4 DNA Polymerase로 말단을 blunt end로 만든다.

그림 1. Oligo(dT)18 Primer를 이용한 두 가닥 cDNA합성 반응

그림 2. Random Primer를 이용한 두 가닥 cDNA합성 반응
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Keyword : 6130

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