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Home > 전제품보기 > 병원체 검출 · 검사 > Carryover prevention 관련 > TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus
Carryover 오염으로 이한 false positive 방지 kit

TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
R013S
TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
50 회
176,800원 
221,000원
가격할인
09.10 ~ 10.19
R013S_A_e.v1203Da.pdf
Takara
R013A
TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
200 회
378,400원 
473,000원
가격할인
09.10 ~ 10.19

제품 설명
End-Point PCR의 경우, 특히 식품·환경 검사 등 동일한 PCR 반응을 반복적으로 실시할 때, 앞서 진행한 PCR 증폭산물이 뒤에 실시할 PCR 증폭산물에 오염되는 이른바 carryover contamination에 의해 위양성 (가짜양성, false positive) 결과가 나올 위험성이 높다.
TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus 는 반복적인 PCR 반응시 이러한 carryover에 의한 위양성을 방지하기 위한 제품이다.
본 제품에서는 dTTP 대신에 dUTP를 기질로, hot start PCR 효소 TaKaRa Taq HS를 이용하여 PCR 증폭을 실시한다. PCR 반응액 조제 후, 우라실 (uracil)을 포함한 DNA를 분해하는 효소인 UNG (Uracil-N-glycosylase)를 처리하면, 우라실을 포함하는 이전 PCR의 증폭산물은 UNG에 의해 분해되지만, 새로이 추가된 주형은 분해되지 않기 때문에, carryover의 영향을 받지 않고 PCR 증폭을 할 수 있다.
UNG에 의한 이전 PCR 산물의 분해
UNG에 의한 분해과정은 다음과 같다.
PCR 반응전에 주형을 첨가한 PCR 반응액을 25℃, 10 분간 incubation하면, UNG에 의한 가수분해 과정에 의해 PCR 반응액에 혼입되어 있는 우라실을 포함한 PCR 산물의 deoxyribose sugar와 우라실 염기 사이에 N-glycosylic bond가 끊겨 탈필리미딘 부위가 생성된다.
이어서 95℃, 2분간 열처리하여 UNG를 실활시키는 동시에 혼입된 DNA단편은 탈염기 부위의 phosphate backbone이 가수분해되어 분해된다.
UNG는 우라실을 포함한 single strand DNA와 double strand DNA는 가수분해하지만, RNA에는 작용하지 않는다.


그림1. TaKaRa Taq™HS PCR Kit, UNG plus를 이용한 PCR 반응 예
내용

R013S (50회: PCR 50 ㎕ 반응시)

1. TaKaRa Taq™ HS(5 U/㎕)

12.5 ㎕

2. 10×PCR Buffer for UNG plus*1 (10×)

250 ㎕

3. dU plus dNTP Mixture*2 (12.5×)

200 ㎕

4. UNG (2 U/㎕)

25 ㎕

 

 

R013A (200회: PCR 50 ㎕ 반응시)

 

1. TaKaRa Taq™ HS(5 U/㎕)

50 ㎕

2. 10×PCR Buffer for UNG plus*1 (10×)

1 ㎖

3. dU plus dNTP Mixture*2 (12.5×)

800 ㎕

4. UNG (2 U/㎕)

100 ㎕


*1 Mg2+농도:22.5 mM (10×)
본 제품은 dUTP 가 dTTP의 3배 농도로 첨가되어 있기 때문에, 전체적으로 dNTP 농도가 높다.
MgCl2와 dNTP의 밸런스를 유지하기 위해, 일반적인 TaKaRa Taq™ Hot Start Version (Code R007A)에 포함되어 있는 10×PCR Buffer (Mg2+ plus)보다 Mg2+ 농도가 높다.

*2 dU plus dNTP Mixture:아래 조성을 가진 수용액 (sodium salt)이다.
    dUTP 7.5 mM
    dATP 2.5 mM
    dGTP 2.5 mM
    dCTP 2.5 mM
보존 - 20℃
실험 예 - 2차 PCR시 carryover 에 의한 증폭을 효과적으로 방지
TaKaRa Taq™HS PCR Kit, UNG plus로 10 ng의 human genomic DNA를 PCR하여 약 500 bp의 1차 증폭산물을 얻은 후, 2 ㎕의 증폭산물에 UNG를 처리하거나 처리하지 않고 2차 PCR을 진행하였다.
그 결과, UNG를 첨가하지 않은 경우 (lane 1)에는 1차 증폭산물을 주형으로 한 PCR 증폭이 일어났고, UNG를 첨가한 경우 (lane 2) 에는 PCR 증폭이 되지 않아 carryover 증폭을 방지할 수 있음을 확인하였다.


Keyword :
-
Carryover prevention 관련
PCR반응시 false positive 검출 예방
> TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit
Carryover 오염으로 이한 false positive 방지 kit
> TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus
열감수성이 높고, 안정된 PCR 결과를 위해
> Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile
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