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최고 레벨의 정확성 & 최고 속도의 신장성

PrimeSTAR® Max DNA Polymerase

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
R045A
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
100 회
250,000원  , 47286
Takara
R045B
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
400 회
800,000원 

제품설명
PrimeSTAR Max DNA Polymerase는 최고 속도의 신장성(5초/kb)과 PrimeSTAR HS DNA Polymerase가 원래 가지고 있는 매우 높은 정확성, 고감도, 고특이성 및 확실성을 겸비한 최고 수준의 PCR 증폭 시스템이다. 효소 자체가 가지고 있는 높은 priming 효율과 독자적인 신장인자(elongation factor)를 첨가하여, annealing 시간과 신장(extension)시간을 큰 폭으로 단축하여, 고속 PCR 반응이 가능하도록 하였다. 또, 지금까지 PCR 반응의 저해요소로 작용했던 다량의 핵산(template DNA)을 포함한 반응도 신장(extension)시간을 표준반응시간(1min/kb)으로 설정하면 증폭이 가능하여, RT-PCR등에도 사용하기 쉬운 효소이다. 본 효소는 상온에서 DNA Polymerase 활성 및 3'→5'exonuclease 활성을 억제하는 단일 클론 항체를 이용한 hot start 효소이며, 반응에 필요한 구성물(buffer, dNTP)을 미리 섞어 놓은 master mix로, 상온에서 빠르고 편리하게 반응액 조제가 가능하다.
내용
PrimeSTAR Max Premix (2×) 625 μl×4
※ dNTP Mixture(각 0.4 mM;2×), Mg2+(2 mM;2×)를 포함한다.
보존
-20℃
동결 융해를 반복하면 활성이 저하될 가능성이 있으므로 주의해 주십시요.
일반적인 PCR 반응액조성 (Total 50 μl)
※ PCR 반응액의 조제는 실온에서도 가능하지만, 효소 등 각 시약은 얼음에 꽂아두고 사용.

 

사용량

최종농도

PrimeSTAR Max Premix(2×)

25 μl

Primer1

10~15 pmol

0.2~0.3 μM

Primer2

10~15 pmol

0.2~0.3 μM

Template

<200 ng*

 

멸균증류수

up to 50 μl

 


고속 PCR로 증폭할 수 있는 최적 주형량(50 μl 반응시);
Human genomic DNA:5~200 ng
대장균 Genomic DNA :100 pg~200 ng
λDNA:10 pg~10 ng
Plasmid DNA:10 pg~1 ng
PCR 조건
※ PrimeSTAR Max DNA Polymerase를 이용한 고속 증폭 시스템에서는 신장 인자(elongation factor)의 효과를 최대한으로 발휘하기 위해서 3 step 반응을 추천 한다.



* 역전사 산물(cDNA)을 template로 하는 고속 반응(5~10 sec./kb)의 경우, template cDNA양을 total RNA ~125 ng(/50 μl 반응)이하로 설정해 주세요. 신장(extension)시간을 긴(1 min./kb)로 설정하면, template양을 늘릴 수 있습니다(total RNA ~750 ng(/50 μl반응)).

    * 변성 조건 98℃ 5~10 sec.를 추천 합니다. 94℃로 하는 경우는 10~15 sec.로 설정해 주세요.
    * Annealing 온도는 우선 55℃로 실험해 주십시요.
    * Annealing 시간은
    Tm값 (아래와 같은 식에서 계산)가 55℃이상의 경우→5 sec.로 설정
    Tm값 (아래와 같은 식에서 계산)가 55℃미만의 경우→15 sec.로 설정

    Tm값 계산방법
    Tm값(℃)=2(NA+NT)+4(NC+NG)-5
    프라이머의 길이가 25 mer 이하의 경우에 적용해 주세요. 25 mer를 넘는 경우는 annealing 시간을 5 sec.로 설정해 주세요.

<중요>
본 효소는 priming 효율이 매우 높은 효소이므로, annealing 시간을 5 sec. 혹은 15 sec.로 설정해주세요. Annealing 시간이 길어지면, smear 패턴(non- specific)이 생길 수 있습니다.
3 step로 smear 패턴이 나타날 경우, 2 step으로 반응조건을 변경해 주세요.
PCR 산물에 대하여
PrimeSTAR Max DNA Polymerase를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 평활 말단이다. 따라서, 그 PCR 산물을 그대로(필요에 따라서 인산화하여) 평활 말단 벡터에 클로닝하는 것이 가능하다.평활 말단 벡터로 클로닝에는 Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)를 이용할 수 있다. T-vector에 클로닝 하는 경우는, PCR 산물의 3' 말단에 dA를 부가해야 한다. T-vector로의 클로닝에는 Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR(Code 6019)를 이용할 수 있다.

【Direct Sequencing을 할 경우】
본 효소는 3'→5'exonuclease 활성을 가지고 있기 때문에, Direct Sequencing을 하기 전에 phenol/chloroform 처리등으로 단백질을 제거해야 한다.

Keyword :
-
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