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Long fragment 및 GC-rich template 증폭에 강한 High Fidelity PCR 효소 PrimeSTAR® GXL의 Premix type

GXL Premix 타입

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
R051A
PrimeSTAR® GXL Premix
관련학술 관심상품등록 구매하기
200 회
(50 ul 기준)
290,000원  R051A_DS.v1902Da.pdf
Takara
R051B
PrimeSTAR® GXL Premix
관련학술 관심상품등록 구매하기
800 회
(50 ul 기준)
1,044,000원 
Takara
R050A
PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
250 U
290,000원  R050A_e.v1906Da.pdf
Takara
R050B
PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
1,000 U
928,000원 

제품설명
PrimeSTAR® GXL Premix는 High-fidelity DNA polymerase인 PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase(code R050A/B)과 reaction buffer, dNTP mixture가 최적의 조건으로 혼합되어 있는 2X premix이다. 본 제품은 long target (30 kb 이상)이나 GC-rich region과 같이 증폭이 어렵거나, 과량의 template가 있는 상태에서도 high fidelity로 증폭이 가능하다.
또한, GC-rich target에서도 특별한 반응 조건 없이 증폭이 가능한 제품이다.
내용
PrimeSTAR® GXL Premix (Code R051A; 200 회, 50 μl 반응시)
1. PrimeSTAR GXL Premix (2X)

1 ml X 5


PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase (Code R050A; 200 회, 50 μl 반응시)*1
1. PrimeSTAR GXL DNA Polymerase (1.25 U/μl)

200 μl

2. 5×PrimeSTAR GXL Buffer (Mg2+ plus)*2

1 ml×2

3. dNTP Mixture (각 2.5 mM)

800 μl

*1 표준 프로토콜, PCR 반응액 50 μl 반응시
*2 Mg2+ 농도는 5 mM (5×)

PCR 반응 조성 (50 μl 반응시, R051A/B 해당)

PrimeSTAR® GXL Premix (2X)

25 μl (final conc. 1X)

Primer 1

10 - 15 pmol (final conc. 0.2 - 0.3 uM)*

Primer 2

10 - 15 pmol (final conc. 0.2 - 0.3 uM)*

Template

하단의 template 권장량 참조

Sterile purified water

Up to 50 μl


* 10 kb이상을 증폭할 경우 primer의 최종농도는 0.2 uM로 사용 하십시오.
PCR 조건
[10 kb 이하 product]

*1 Pirmer의 Tm값이 55℃ 이상인 경우 annealing 온도를 60℃로, Primer Tm값이 55℃ 이하일 경우에는 55℃로 설정해 주세요.
    Tm값(℃)=2 X (A갯수+T갯수)+4 X (C갯수+G갯수)-5
*2 3-step PCR의 경우, extension 온도를 68℃로 설정해 주세요.

[10 kb - 30 kb product]


[30 kb 이상 product]


* PCR 조건의 선택
- 10 kb 이하의 product는 먼저 3-step으로 시행해 주십시오.
- 10 kb 이상 또는 GC-rich target의 경우 2-step PCR을 권장합니다.
Reaction parameter의 최적화
최상의 PCR 결과를 얻기 위해, PrimeSTAR® GXL Premix 효소의 특성과 이점을 최대한 극대화시키기 위해 반응 parameter의 최적화가 중요합니다.
(1) Primer design
Primer design 프로그램을 이용하여 Primer 서열을 선정

[10kb 이하의 Product]
일반적인 증폭에 해당하는 경우로, 20-25 mer 길이의 primer가 적합하며, Tm값이 55℃ 이상이거나 25 mer 보다 긴 primer가 최적의 결과를 나타낼 수 있습니다.

[10 kb 이상의 product]
25-35 mer 길이로 Tm값이 65℃ 이상 되도록 Primer를 디자인 하십시오. 3’ 말단에 높은 GC rich를 피해주세요.

[GC-rich 증폭산물]
Tm값이 60℃ 보다 크게 되도록 Primer를 디자인하세요.

* 주의 : PrimeSTAR® GXL Premix를 사용할 경우 inosine이 포함된 Primer를 사용하지 마십시오.
   
(2) 50ul 반응에 대한 Template DNA의 권장량
    (for long PCR product)
Human genomic DNA 5 - 500ng (100 - 500ng)
E. coli genomic DNA 100pg - 200ng (10 - 200ng)
Plasmid DNA 10pg - 10ng (1 - 10ng)
cDNA 25 - 750ng (250 - 750ng)

* 주의 : bisulfite-treated DNA와 같이 uracil이 함유된 template를 사용하지 마십시오.
보존
-20℃ (장기간 보존시), 4℃ (3개월까지 보존)
PCR 산물에 대하여
PrimeSTAR® GXL Premix를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 평활 말단 (Blunt End)이다. 따라서, 그 PCR 산물을 그대로 (필요에 따라서 인산화하여) 평활 말단 벡터에 클로닝하는 것이 가능하다. 평활 말단 벡터로의 클로닝에는 Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)를 이용할 수 있다. T-vector에 클로닝 하는 경우는, PCR 산물의 3' 말단에 dA를
부가해야 한다. T-vector로의 클로닝에는 Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR®(Code 6019)를 이용할 수 있다.

【Direct Sequencing을 할 경우】
본 효소는 3'→5'exonuclease 활성을 가지고 있기 때문에, direct Sequencing을 하기 전에 phenol/chloroform 처리 등으로 단백질을 제거해야 한다.

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High fidelity PCR: PrimeSTAR
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> 기본-HS DNA Polymerase
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> HS (Premix)
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> HS with GC Buffer
> Pyrobest DNA Polymerase
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