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Helper Free 시스템에 의한 다양한 serotype의 AAV vector 제작

AAVpro® 1, 2, 5, 6, 8 ,9 Vector System

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)
Takara	6673	AAVpro® Helper Free System (AAV1)	1 Kit (Package)	1,484,000원
Takara	6230	AAVpro® Helper Free System (AAV2)	1 Kit (Package)	1,484,000원
Takara	6650	AAVpro® Helper Free System (AAV5)	1 Kit (Package)	1,484,000원
Takara	6651	AAVpro® Helper Free System (AAV6)	1 Kit (Package)	1,484,000원
Takara	6680	AAVpro® Helper Free System (AAV8)	1 Kit (Package)	1,484,000원
Takara	6690	AAVpro® Helper Free System (AAV9)	1 Kit (Package)	1,484,000원
Takara	6672	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV1)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6234	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV2)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6664	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV5)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6665	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV6)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6681	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV8)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6691	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV9)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6266	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV2) (KmR)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6616	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV6) (KmR)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6866	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV8) (KmR)	1 ㎎ each	1,484,000원
Takara	6696	AAVpro® Packaging Plasmid (AAV9) (KmR)	1 ㎎ each	1,484,000원

Product index

- Helper virus를 사용하지 않고 안전하게 adeno-associated virus vector (AAV vector) 제작
- 독자적인 AAV Extraction Solution을 이용한 효율적이고 간편한 AAV vector 추출
- AAV2 system은 hsa-miR-342 탑재한 vector 사용으로 고역가 바이러스 제작
- 고용량의 packaging plasmids 별도 라인업으로 편리하게 대량 생산 가능
- kanamycin 내성유전자를 갖는 AAV vectors 생산을 위한 plasmid 라인업 보유; 임상 개발에서 사용 가능

제품 설명

Adeno-Associated Virus (AAV)는 분열하거나 분열하지 않는 세포 모두에 감염시킬 수 있는 non-enveloped의 single stranded DNA virus로 helper virus가 존재시에만 복제가 가능하며 인간에게는 비병원성으로 다양한 세포에 유전자를 도입하는 유용한 방법이다. 특히, 유전자치료를 위한 유용한 vector로 사용되고 있다.
AAV는 100개가 넘는 다양한 혈청형 (serotype)이 존재하고 혈청형에 따라 host나 바이러스의 특성이 다른 것으로 알려져 있다. Serotype 2 (AAV2)는 오래전부터 널리 연구되어 온 serotype으로 다양한 세포를 감염시킬 수 있다. Serotype 1 (AAV1), Serotype 5 (AAV5), Serotype 6 (AAV6), Serotype 8 (AAV8), Serotype 9 (AAV9)는 보다 조직 감염특이성을 가진 혈청형으로, AAV1은 근육, 간, 기도, 중추신경계 등에, AAV5는 중추신경계, 간, 망막 등에, AAV6는 심장, 근육, 간 등에, AAV8은 간, 근육, 중추신경계 등에, AAV9는 중추신경계, 심장, 간, 근육 등에 대한 유전자 도입효율이 높다고 알려져 있다.
다카라에서는 Serotype 1, 2, 5, 6, 8, 9의 AAV vector를 helper virus없이 안전하게 제작할 수 있는 AAVpro^® Helper Free System을 판매하고 있다. 본 제품으로 만들어진 AAV 바이러스 입자를 이용하여 표적 세포나 동물 개체에서 목적 유전자를 일시적으로 발현시킬 수 있다.

AAVpro^® Helper Free System을 이용한 AAV Particle 제작 개요
AAVpro^® Helper Free System은 helper virus를 사용하지 않고, 고역가의 AAV를 제작하는 시스템이다. 본 제품에 포함된 3종류의 플라스미드를 HEK293T 세포에 도입하여 간편하게 AAV 입자를 제작할 수 있다.

pAAV-CMV Vector: CMV promoter와 목적유전자를 삽입하기 위한 MCS 및 2개의 ITR을 포함하는 vector plasmid
pRC Vector: AAV2의 Rep 유전자와 각 serotype의 Cap 유전자를 포함한 plasmid
pHelper Vector: Adenovirus E2A, E4와 VA 유전자를 포함하는 plasmid

다카라에서 독자적으로 개발한 AAVpro^® Extraction Solution을 이용하면 기존에 사용하던 동결/융해법 또는 초음파 파쇄법에 비해 AAV producing cell로부터 숙주단백질이나 핵산의 혼입을 최소화하며, 간편하게 AAV 입자를 추출할 수 있다. 추출시약은 System 제품 내에 포함되어 있으며, AAVpro^® Extraction Solution (Code 6235)으로도 판매하고 있다.
또한 고효율의 in vivo 유전자 도입을 위한 AAV 정제에는 AAVpro^® Purification Kit Maxi/Midi (All Serotype) (Code 6666/6675) 또는 AAVpro Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes) (Code 6676)를 이용할 수 있다.

그림 1. AAVpro^® Helper Free System을 사용한 AAV 생산
HEK293T cells에 세 종류의 plasmid (pHelper, pAAV-CMV, pRC2-mi342)를 co-transfection하면 recombinant AAV를 생산하는데 필요한 모든 단백질을 발현하게 된다. 이후 cell 안에서 packaging된 AAV는 AAVpro^® Extraction Solution (Code 6235)로 추출할 수 있다.

그림 2. 각 system에 포함된 3종류의 plasmid map
pRC2-mi342 vector는 Code 6230 제품에 포함된 vector다. 그 외 다른 system에 포함된 vector는 제품 매뉴얼을 참고.

내용

AAVpro^® Helper Free System (AAV2) (Code 6230)

1	pAAV-CMV Vector (1 ㎍/㎕) ^*1	20 ㎕
2	pRC2-mi342 Vector (1 ㎍/㎕) ^*2	20 ㎕
3	pHelper Vector (1 ㎍/㎕)	20 ㎕
4	AAV Extraction Solution A	1.5 ㎖ × 3
5	AAV Extraction Solution B	150 ㎕ × 3

^*1 pAAV-CMV Vector에 삽입할 목적유전자의 사이즈는 ~2.5 kb 이다.
^*2 AAVpro^® Helper Free System (AAV1) (Code 6673)에는 pRC1 vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV5) (Code 6650)에는 pRC5 Vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV6) (Code 6651)에는 pRC6 Vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV8) (Code 6680)에는 pRC8 Vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV9) (Code 6690)에는 pRC9 Vector 가 포함되어 있다.

AAVpro^® Packaging Plasmid (AAV2) (Code 6234)

1.	pRC2-mi342 Vector (1 ㎍/㎕) ^*3	0.5 ㎖ × 2
2.	pHelper Vector (1 ㎍/㎕)	0.5 ㎖ × 2

^*3 AAVpro^® Helper Free System (AAV1) (Code 6673)에는 pRC1 vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV5) (Code 6650)에는 pRC5 Vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV6) (Code 6651)에는 pRC6 Vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV8) (Code 6680)에는 pRC8 Vector, AAVpro^® Helper Free System (AAV9) (Code 6690)에는 pRC9 Vector 가 포함되어 있다.

AAVpro^® Packaging Plasmid (KmR) (AAV8) (Code 6866)^**

1.	pRC8-Km Vector (1 ㎍/㎕) ^*4	0.5 ㎖ × 2
2.	pHelper-Km Vector (1 ㎍/㎕)	0.5 ㎖ × 2

^*4 각 혈청형에 대응한 pRC Vector가 세트로 포함되어 있다.

^** AAVpro^® Packaging Plasmid (KmR)를 사용하는 경우, 목적 유전자를 삽입하는 플라스미드 vector는 pAAV-CMV Vector 대신 pAAV-ZsGreen1 Vector (KmR) (Code 6610)에서 ZsGreen1을 제거 후 목적유전자를 삽입하여 사용해야 한다.

Vector 서열 (vector명 클릭 시 .fasta data 다운 가능)

pAAV-CMV(fasta data)	6673, 6230, 6650, 6651, 6680, 6690 내 포함
pHelper (fasta data)	6673, 6230, 6650, 6651, 6680, 6690 내 포함
pHelper-Km(fasta data)	6266, 6616, 6866, 6696 내 포함
pRC1(fasta data)	6673 내 포함
pRC5(fasta data)	6650 내 포함
pRC6(fasta data)	6651 내 포함
pRC2-mi342(fasta data)	6230 내 포함
pRC8(fasta data)	6680 내 포함
pRC9(fasta data)	6690 내 포함
pRC2-Km(fasta data)	6266 내 포함
pRC6-Km(fasta data)	6616 내 포함
pRC8-Km(fasta data)	6866 내 포함
pRC9-Km(fasta data)	6696 내 포함

보존

-20 ℃
단, AAV Extraction Solution A및 AAV Extraction Solution B는 융해 후, 실온 보관

AAVpro® 1, 2, 5, 6, 8 ,9 Vector System

제품 설명

내용

Vector 서열 (vector명 클릭 시 .fasta data 다운 가능)

보존

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