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- 다공성 스펀지로 빠르고 효과적으로 lentivirus transduction 효율 증대
- 스펀지 하나로 24 well plate 크기의 1 well에서 105~107 cell에 transduction 가능
- Spinoculation과 polybrene을 사용하지 않아 세포 손상이 적음
- Transduction이 어려운 primary cell 및 다양한 cell-line에 적용 가능
- 작은 reaction volume으로 소량의 바이러스로도 실험 가능
제품설명
Lenti-X™ Transduction Sponge는 다공성 alginate (알긴산)로 구성된 스펀지로 간편하게 lentivirus transduction을 촉진한다. 스펀지의 다공성 microfluidics 구조는 세포와 lentivirus간 물리적 거리를 좁혀 spinoculation이나 chemical enhancer (e.g. Polybrene) 없이도 세포 독성을 최소화하면서 빠른 시간 안에 효과적으로 transduction을 진행한다. 24 well plate 크기의 스펀지당 한번에 105~107 cell을 transduction할 수 있으며 별도의 microfluidics 기기 없이 형질도입이 어려운 cell-line (부착형, 부유형 세포 모두 가능) 및 primary cell 등 다양한 세포에 transduction을 진행할 수 있다.
cell handling이 짧은 간편한 workflow, Mix-Drop-Spin
그림 1. Lenti-X™ Transduction Sponge workflow
1. 타겟 세포와 lentivirus를 혼합 (총 부피 최대 150 ㎕).
2. 스펀지를 24well plate로 well당 1개씩 옮기고 1번의 mixture를 스펀지 위로 dropwise 방식으로 첨가 및 흡수.
3. 37 ℃의 CO2 인큐베이터에서 1시간동안 incubation 후 well에 배지를 추가로 1 ㎖ 첨가, 이후 인큐베이터에서 16~24시간 배양.
4. 다음날 배지와 스펀지를 모두 15 ㎖ 튜브로 옮기고 Release Buffer 1 ㎖를 첨가 후 원심분리하여 스펀지를 용해, 용해 후 방출된 세포를 PBS로 2회 wash.
5. Transduction된 세포를 새 culture vessel로 이동 후 배양.
그림 2. Lenti-X™ Transduction Sponge외관 및 사용법
A: 제품 사진 (개별 포장된 스펀지 24개)
B: 다공성 스펀지의 확대사진 (150배), 20~300 ㎛의 microfluidics 구조
C: 핀셋으로 스펀지를 24 well plate로 옮기는 과정
D: 스펀지에 세포와 바이러스 mixture를 첨가한 뒤 1시간 동안 incubation하는 과정
패널 E: Transduction (16~24시간 incubation)후 스펀지를 15 ㎖ 튜브로 옮기는 과정
Lenti-X Transduction Sponge 적용 cell types
본 제품의 장점은 일반적으로 사용되는 cell line 및 hard-to-transduction한 primary cell를 포함하여 다양한 세포 유형에 적용할 수 있고 동일한 프로토콜을 간편하게 적용할 수 있다는 것이다.
Species |
Origin/tissue type |
Cell type |
Test 기관 |
Human |
B-cell lymphoma |
Raji |
TBUSA |
Human |
Cord blood |
CD34+ HSC (primary) |
TBUSA & 외부 협력업체 |
Human |
Embryonic kidney |
HEK-293T |
외부 협력업체 |
Human |
Foreskin |
BJ |
TBUSA |
Human |
Hepatocyte carcinoma |
HepG2 |
TBUSA |
Human |
Monocyte |
THP-1 |
TBUSA & 외부 협력업체 |
Human |
Monocyte |
U937 |
TBUSA |
Human |
Myeloid leukemia |
K562 |
TBUSA |
Human |
Myoblast |
C2C12 |
TBUSA |
Human |
PBMC |
CD3+ T cell (primary) |
TBUSA and TBJapan |
Human |
PBMC |
LCL |
외부 협력업체 |
Human |
PBMC |
NK (primary) |
TBUSA |
Human |
Retinal pigment epithelial |
RPE-1 |
TBUSA |
Human |
Sarcoma line |
HT1080 |
TBUSA & 외부 협력업체 |
Human |
T cell |
Jurkat |
TBUSA |
Human |
T lymphoblast |
CCRF-CEM |
TBUSA |
Mouse |
Breast |
4T1 |
외부 협력업체 |
Mouse |
Fibroblast |
Wehi-13 |
TBUSA |
Mouse |
Hematopoietic stem |
LSK cell |
외부 협력업체 |
Mouse |
Mast cell |
11PO-1 |
TBUSA |
Mouse |
Pancreas |
Beta TC-6 |
외부 협력업체 |
Mouse |
T cell |
EL-4 |
TBUSA |
실험 데이터
그림 3. Lenti-X™ Transduction Sponge은 다양한 cell에서 spinoculation (with polybrene)과 동등하거나 더 효과적인 transduction이 가능.
A: 1 X 106 Jurkat 세포에 spinoculation과 Lenti-X™ Transduction Sponge 방법으로 ZsGreen1을 발현하는 lentivirus를 MOI 0, 1, 5, 10로 transduction한 결과이다. Spinoculation은 cell plate를 Polybrene 8 ㎍/㎖과 함께 32℃에서 1,400 x g로 90분간 원심분리하였고, Lenti-X™ Transduction Sponge는 제품의 사용자메뉴얼에 따라 진행하였다. 두 방법 모두 transduction 48시간 뒤 ZsGreen1의 발현율을 FCM (Flow Cytometry)으로 분석하여 정리하였다. 그 결과 Lenti-X™ Transduction Sponge가 spinoculation 방법보다 간편하고 더욱 효과적이었다.
B: ZsGreen1 발현 lentivirus를 패널 A와 동일한 방법으로 다양한 cell line에서 transduction한 결과이다. 다양한 세포에서 Lenti-X™ Transduction Sponge는 spinoculation 방법과 동등하거나 더 효과적이었다.
그림 4. Lenti-X™ Transduction Sponge는 primary T cell의 viability를 유지하면서 transduction 효율을 높일 수 있다.
A. Human primary T cell을 MHC tetramer, antiCD3/CD28-coated bead, RetroNectin+CD3, CD3를 각각 사용하여 활성화시켰고, 48시간 뒤 CD69+의 발현을 측정하여 활성화 정도를 측정하였다. 이후 1 x 106 개의 활성화된 세포에 Lenti-X™ Transduction Sponge를 사용해 24시간 동안 ZsGreen1을 발현하는 lentivirus로 transduction하고, transduction 48시간 후 FACS로 ZsGreen1의 발현율을 측정하여 %로 정리한 결과이다.
B. Transduction 48시간 후 7-AAD 염색과 FACS를 사용해 viability를 측정한 결과, 높은 viability를 확인할 수 있었다.
보존: 4℃ (Lenti-X™ Transduction Sponges는 건조제와 함께 파우치 보관)
내용
Lenti-X™ Transduction Sponges |
24 |
Release Buffer |
30 ㎖ |
Forceps |
1 |
관련제품
- CGT 연구에 주로 사용되는 cell들에 적용 가능한 transduction enhancer: RetroNectin® (Code T100A)
- Lentivirus 농축, 일반원심분리기로 1시간만에 100배: Lenti-X™ Concentrator (Code 631231 외)
- 재현성 있는 실험을 위해서는 titration이 필수입니다.
qPCR법: Lenti-X™ qRT-PCR Titration Kit (Code 631235)
ELISA법: Lenti-X™ p24 Rapid Titer Kit (Single Wash) (Code 631476)
Lateral flow법 정량, 10분 완성: Lenti-X™ GoStix™ Plus (Code 631280)
