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BCA 단백질 정량 Kit

TaKaRa BCA Protein Assay Kit

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 T9300A
 TaKaRa BCA Protein Assay Kit
관련학술 구매하기 		500회
 182,000원  T9300A_e.v1906Da.pdf



  • Bicinchoninic acid (BCA) 시약을 이용한 단백질 정량 kit
  • 간단한 조작으로 단시간에 단백질 정량 가능
  • 단백질 종류에 영향을 받지 않아 0.02~2 mg/㎖의 넓은 범위에서 단백질 정량 가능
  • 계면 활성제에 의한 영향을 받지 않음
제품 설명
TaKaRa BCA Protein Assay Kit은 매우 높은 감도의 발색 반응(colormetric)을 이용하여 단백질의 양을 정량하며, 계면활성제로 가용화된 단백질의 정량도 가능하다.
BCA 단백질 정량의 원리는 2단계로 이루어진다. 첫 번째 단계는 알칼리성(약 염기성)용액내의 정량하려는 단백질의 펩타이드 결합에 의해 Cu+2이 Cu+1으로 환원된다(biuret reacton). 이 때, 환원된 Cu+1의 양은 용액에 포함된 단백질의 양에 비례한다. 두 번째 단계에서 2분자의 Bicinchoninic acid (BCA)가 환원된 Cu+1와 배위 결합하여 562nm에서 강한 흡광도를 나타내는 파랑-보라색의 화합물을 형성한다. 이것을 분광 광도계(spectrophotometer)를 사용하여 측정 및 정량한다.
BCA에 의한 단백질 정량은 단백질의 종류에 따른 차이가 적어 0.02~2 mg/㎖의 넓은 범위에서 정량이 가능하며, 계면활성제에 의한 영향을 받지 않는다. 하지만, 환원제 및 킬레이트계 물질은 반응성에 영향을 주기 때문에, 해당 물질이 포함된 용액의 정량에는 적합하지 않다(공존물질의 영향은 <표. 1> 참고).
단백질의 정량은 본 제품에 포함된 BSA 표준물질을 사용하여 검량 곡선(standard curve)을 작성 후 샘플의 농도를 결정한다.


그림 1. Standard Curve for BSA from 0 - 2,000 μg/㎖
내용
1 ㎖ 반응 시 500회, microtiter plate를 이용한 200 ㎕ 반응 시 2,500회의 측정을 할 수 있다.
1. BCA Reagent A 250 ㎖×2
2. BCA Reagent B 20 ㎖
3. BSA Standard Solution (2 mg/ml)* 1 ㎖×10
* : BSA Standard Solution은 안정화를 위해 0.9% NaCl, 0.05% NaN3 를 포함한다.
보존
BCA reagent A, BCA reagent B : 실온
BSA Standard solution : 4℃
*본 제품은 상온에서 배송됩니다. 제품 수령 후 BSA Standard Solution은 4℃에 보관하세요.
제품 이외에 필요한 것
  • Spectrophotometer and compatible 1 ㎖ cuvette
  • Microplate reader and compatible microplate
  • Benchtop centrifuge
  • Microtubes (2 ㎖ or 1.5 ㎖)
  • Water bath (37℃)
  • Incubator (60℃) (for the low-concentration measurement protocol)
단백질 정량 샘플에 공존 물질에 의한 영향
BCA 방법은 비교적 계면활성제나 Buffer에 대한 영향을 받지 않지만, 고농도의 킬레이트계 및 환원제 물질은 측정에 영향을 준다. <표. 1>에는 측정에 영향을 주지 않는 농도를 표기하였다.

<표. 1> 단백질 정량 샘플의 공존물질 허용농도
단백질 종류에 따른 영향
BCA assay는 단백질 종류에 따른 측정 값의 변동이 적다는 특징이 있다.

<그림. 2>는 일반적으로 사용되는 표준물질 BSA와 BGG를 단계희석 후 측정하여 표준곡선을 작성하였다. <표. 2>는 15종류의 단백질의 발색률을 BSA의 발색률과 비교하였다.

<그림. 2> 0~2,000 μg/㎖ 농도 범위의 BSA와 BGG의 표준 곡선

<표. 2> 표준 프로토콜의 BSA에 대한 각종 단백질의 발색률

*Ratio: (각종 단백질의 흡광도 평균값) / (BSA의 흡광도 평균값)

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