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Cell lysate에서 His-tagged protein 직접 정제

TALON (Cobalt) CellThru resin

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Clontech
635509
TALON CellThru Resin
관련학술 구매하기
10 ml
292,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33126, x33127
Clontech
635510
TALON CellThru Resin
관련학술 구매하기
100 ml
2,014,000원  제조사 페이지로 바로가기
Clontech
635513
CellThru 10-ml Disposable Columns
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20 개
286,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33126, x33127
Clontech
635651
HisTALON Buffer Set
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20 회
472,000원  제조사 페이지로 바로가기 x32713, x32714, x33126, x33127

  • 빠르고 간편한 프로토콜: crude cell lysate에서 직접 정제
  • 막단백질 또는 multiprotein complex의 정제에 최적
  • Cobalt 이온을 이용한 IMAC resin : Nickel resin 보다 고순도로 his-tagged protein 정제
제품 설명
TALON® CellThru Resin은 cell lysate, 초음파 파쇄 샘플, fermenter에서 회수한 세포 등에서 his-tagged protein을 정제할 수 있는 IMAC resin이다. 기존의 TALON® Metal Affinity Resin과 같이 독자적인 리간드를 가지고 있지만 더 큰 beads (300-500㎛)를 사용하여 원심분리 없이도 세포 잔해물이 resin을 통과할 수 있다. 신속한 1 step 과정으로 crude lysate에서 his-tagged protein을 직접 정제하므로, 기존 방법 보다 단백질 분해 가능성을 낮추고 높은 수율로 단백질을 정제할 수 있다.
일반적인 resin을 사용하면 cell lysate를 column에 적용하기 전에 원심분리 등을 통해 cell debris를 제거하는 과정이 필요한데, 이 때 정제하고자 하는 막 결합 단백질 또는 단백질 복합체가 세포 잔여물과 함께 제거되는 경우가 있다. 반면, TALON® CellThru Resin을 이용하면 cell lysate의 원심분리 과정 없이 그대로 resin에 적용할 수 있으므로, 샘플 안에 존재하는 막 결합 단백질 또는 단백질 복합체를 성공적으로 정제할 수 있다.
크기가 큰 agarose beads로 구성된 본 resin은 구멍이 막히는 것을 막기 위해 지름이 큰 일반 chromatography column에 충진해서 사용하거나, 세포 잔여물을 쉽게 통과시킬 수 있도록 90~130㎛의 필터를 장착하여 판매 중인 CellThru-10㎖ Disposable Column과 함께 사용하면 된다.
TALON® resin의 특징
TALON resin
TALON® resin은 cobalt를 이용해 his-tagged protein을 정제하는 immobilized metal affinity chromatography (IMAC) resin이다. Cobalt는 nickel보다 his-tagged protein에 대해 높은 특이성을 나타내므로 his-tagged protein을 고순도로 정제할 수 있다.
Cobalt를 포함한 결합 부위
TALON® Metal Affinity Resin은 결합 부위에 cobalt 이온을 포함하고 있어, his-tagged protein에 대해 매우 높은 특이성을 가지고 있다. Cobalt 이온을 포함한 TALON® 결합부위는 histidine의 위치에 매우 까다로워 histidine이 공간적으로 연속해 있거나, 가까이 위치한 (6x HN tag, HAT tag 등) 단백질만 resin에 결합할 수 있다. 반면 nickel 기반의 resin (Ni-NTA resin 등)은 이러한 특이적인 서열이 아닌 histidine이 불규칙하게 배치된 서열에도 결합하므로, 상대적으로 cobalt 기반의 TALON® resin이 nickel에 비해 his-tagged protein을 특이성 높게 정제할 수 있다.
금속이온 탈락이 적은 균일한 matrix 구조
Cobalt resin은 nickel resin에 비해 더 균일한 구조를 가진다. TALON® resin은 3차 포켓구조를 형성하며 각각 3개의 carboxyl 그룹과 하나의 질소원자가 cobalt 양이온과 결합한 구조로, 이러한 구조는 cobalt 이온이 2개의 인접한 histidine 잔기와 결합되도록 한다. 따라서 cobalt 이온이 매우 단단하게 결합되어 있어 resin에서 누출되지 않는다. 반면 nickel resin은 nickel 이온이 TALON® ligand와 유사한 3차 포켓구조나 평면구조, 즉 2개의 다른 배위구조를 형성할 수 있어 TALON®에 비해 구조가 덜 균일하다. 평면 구조에서 nickel 이온은 2개의 carboxyl 그룹과 하나의 질소원자에 결합하고 있어 TALON®에 비해 결합이 약하고 nickel 이온을 강하게 유지할 수 없어 resin에서의 누출이 일어난다. 균일한 matrix를 형성하는 TALON® Metal Affinity Resin은 여러 정제 조건 하에서 높은 결합능력을 가지므로 확실하게 his-tagged protein을 정제할 수 있다.


그림. TALON® CellThru Resin을 이용한 단백질 정제
E. coli BL21 을 TALON® wash buffer에서 sonication 한 후 TALON® CellThru column을 이용하여 150 mM imidazole로 정제하였다. M: molecular weight marker.
(Note: Membrane fraction에 남아있는 타겟 단백질의 일부는 nonabsorbed material 구획에서 확인됨)


그림. TALON® CellThru Resin & CellThru 10-㎖ Disposable Columns
보존
TALON® CellThru:4℃
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
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