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Chaperone 포함 - 단백질 가용화 효율 향상

ProFold Baculovirus Vectors

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
AB Vector
AV101
ProFold-C1
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25 ㎕
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AB Vector
AV102
ProFold-C2
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25 ㎕
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AB Vector
AV103
ProFold-ER1
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25 ㎕
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AB Vector
AV106
ProFold-PDI
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25 ㎕
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AB Vector
AV100
ProGreen
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25 ㎕
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제품 설명
재조합 baculovirus를 이용한 단백질 발현시스템은 post-translational modification (phosphorylation, glycosylation 등)이 포유류 세포에 가깝고, 분자량이 큰 단백질의 발현이 가능하며, 가용성 단백질을 대량 발현시킬 수 있는 등 E. coli나 yeast와 같은 bacteria 시스템에 비해 여러 가지 장점을 가지고 있어 포유동물 유래 단백질의 대량 발현시스템으로서 구조 해석 연구나 기능 해석 연구에 응용되고 있다.
그러나 종종 세포 내에서 과발현 (over-expression)에 의한 mis-folding으로 목적단백질이 inclusion body를 형성하거나 효소에 의해 분해되는 경우가 발생한다.
이러한 현상은 대부분은 세포 내의 chaperone이 고갈되어 발생하는 것으로 생각되어, chaperone 발현 vector를 함께 도입하는 방법이 시도되고 있으나, 도입된 세포의 chaperone 발현량에 차이가 있어 목적 단백질의 가용성과 발현 수율의 안정성에 영향을 미친다는 한계가 있었다 (그림1).


그림1. Comparison of multi-vector chaperone systems used in prior studies (A) with ProFold™ single vector chaperone system (B).

본 ProFold™ baculovirus DNA는 이러한 문제를 개선하기 위해 Clontech의 핵다각체병 바이러스 (Autographa californica nuclear polyhedrosis virus; AcNPV) 유래 BacPAK6 Viral DNA (Bsu36Ⅰdigest) (Kitts A.P. and Possee R.D., Biotechniques, 14 :810-817, 1993.)를 개량하여 제작된 baculovirus DNA이다. 핵다각체병 바이러스 감염말기에 대량 발현되는 polyhedrin을 코딩하는 virus genome 부위를 제한효소 Bsu36 I으로 절단하여 선형화한 DNA에 인간 유래 (일부 효모 유래) chaperone을 코딩하는 유전자를 포함하고 있다.
본 제품과 목적유전자를 포함하는 transfer vector를 곤충세포주 (Sf9, Sf21 등)에 co-transfection하여 polyhedrin부위의 homologous recombination을 통해 목적유전자를 발현하는 recombinant baculovirus를 효율적으로 만들 수 있다. ProFold™ baculovirus DNA 시리즈는 발현하는 목적 단백질의 세포내 위치 (세포질 단백질, 막 단백질, 분비형 단백질 등)과 ER (소포체) 로의 이동성 등을 고려하여 최적의 chaperone 조합을 선택할 수 있다 (표1).

표1. 다양한 ProFold™ baculovirus DNA 시리즈

Marker 또는 Chaperone 종류

GFP

β-gal

Hsc70

Hsp40

Calreticulin

PDI

역할

증식 모니터링, 역가측정에 이용

Plaque assay에 이용

세포질내 Chaperone

세포질내 chaperone

ER 내강에서 당단백질 folding

ER에서 disulfide bond 재조합

제품명

Code

Protein Expression level

ProGreen™

AV100

+++

+++++

 

 

 

 

ProFold-C1™

AV101

+++

+++++

+++

++

 

 

ProFold-C2™

AV102

+++

++++

+++

+++++

 

 

ProFold-ER1™

AV103

+++

+++++

 

 

+++

++++

ProFold-PDI™

AV106

 

+++++

 

 

 

++++


ProFold™-C1, ProFold™-C2는 세포질 내의 주요한 chaperone인 인간 유래 Hsc70/Hsp40를 발현하는 baculovirus DNA로, 목적 단백질을 세포질에서 발현시키고자 하는 경우 최적이다.
ProFold™-ER1는 인간 유래 calreticulin 및 PDI (protein disulfide isomerase)가 코딩되어 있고, 막단백질, 분비 단백질, 혹은 cysteine-rich 단백질 등 ER이동성 당단백질의 발현에 최적이다.
또한, ProGreen™, ProFold™-C1, ProFold™-C2, ProFold™-ER1에는Aequorea victoria 유래의 녹색 형광 단백질인 GFP를 마커로 발현하므로, 바이러스 증식 모니터링, 배양 조건의 최적화에 유용하고, 이를 control로 역가확인에도 활용할 수 있다.
내용 각 baculovirus DNA 25 ㎕ (2.5 ㎍)
보존 4 ℃
사용상 주의
제품 내에 사용 매뉴얼이 포함되어 있지 않습니다. Homologous recombination에 따른 일반적인 recombinant baculovirus 구축 방법이 필요한 경우 BacPAK™ Baculovirus Expression System (Code 631402) 제품의 매뉴얼 (링크)를 참고하시기 바랍니다.
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Keyword :

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