- 다양한 serotype의 AAV를 정량
- 빠르고 간편하게 약5시간만에 AAV 정량
- 일반적인 DNA blot 또는 ELISA 방법 대비 정확한 titration 측정
- Packaging cell line에서 AAV 추출, Real Time PCR까지 필요한 모든 구성품 포함
* 본 제품은 ssAAV를 검출하기 위한 목적으로 ssAAV의 titer를 측정할 수 있습니다.
제품 설명
Adeno-Associated Virus (AAV)는 분열 및 비분열 세포에 모두 적용이 가능하며, 특히 비분열 세포에서 장기간 유전자 발현이 가능하다. 또한 면역원성 (immune response)이 낮아 in-vivo 실험에 최적화된 바이러스이다.
AAV의 역가측정은 감염 조직 및 감염 방법에 최적인 AAV의 양을 결정하고 일관된 실험 결과를 도출하기 위해 매우 중요하다. AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)은 다카라가 독자적으로 개발한 Real Time PCR방식의 titration Kit로 빠르고 효율적으로 AAV의 역가를 측정할 수 있다.
이 제품에는 AAV packaging cell line에서 AAV를 추출하는 과정부터 Real Time PCR 정량을 위한 시약이 모두 포함되어 있다. AAV vector 양 말단에 존재하는 ITR (Inverted Terminal Repeat)을 target으로 AAV genome을 검출하기 때문에, 기존의 DNA blot 또는 ELISA 법에 비해 빠르고 정확한 결과를 얻을 수 있으며, 다양한 AAV serotype*1에 적용할 수 있다.
*1 AAV에서 일반적으로 사용하는 AAV2유래의 ITR 서열을 검출하므로, ITR영역이 AAV2로부터 유래한 서열이면 serotype에 관계없이 정량 가능하다.
그림 1. AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) workflow
그림 2. 다양한 serotype에서 AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) 적용성 확인
ITR 서열 (AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)에서 사용)과, CMV의 서열을 타겟하는 각각의 primer set을 사용해 AAV1, 2, 6의 세 종류의 바이러스에 역가를 측정하였다. 그 결과 세 종류의 serotype 모두 CMV를 타겟한 결과와 유사한 경향을 보여 AAVpro® Titration Kit가 AAV2유래의 ITR 서열을 가진 다양한 serotype의 AAV 정량에 이용 가능하다는 것을 확인했다.
내용
AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) (Code 6233, 100 회)
| 1. |
AAV 추출 시약
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AAV Extraction Solution A
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2 x 1.5 ㎖
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AAV Extraction Solution B
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300 ㎕
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2.
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AAV genome 간이 추출 (100 회)
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DNase I
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100 ㎕
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10×DNase I Buffer
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200 ㎕
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Lysis Buffer
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2 x 1 ㎖
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3.
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Real Time PCR (25 ㎕ 반응 시, 100회)
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TB Green™ Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)
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2 x 625 ㎕
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AAV Forward Titer Primer
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20 ㎕
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AAV Reverse Titer Primer
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20 ㎕
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dH2O
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3 x 1 ㎖
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ROX Reference Dye
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50 ㎕
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ROX Reference Dye II
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50 ㎕
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Positive Control
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50 ㎕
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EASY Dilution (for Real Time PCR)
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5 x 1 ㎖
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보존
TB Green® Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus): 4℃, 차광 (장기 보존시 -20℃, 융해 후에는 4℃ 보존)
그 외: -20 ℃ (AAV Extraction Solution A, B, Lysis Buffer는 융해 후는 실온 보존)
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