• 다공성 스펀지로 빠르고 효과적으로 lentivirus transduction 효율 증대
• 스펀지 하나로 24 well plate 크기의 1 well에서 10⁵~10⁷ cell에 transduction 가능
• Spinoculation과 polybrene을 사용하지 않아 세포 손상이 적음
• Transduction이 어려운 primary cell 및 다양한 cell-line에 적용 가능
• 작은 reaction volume으로 소량의 바이러스로도 실험 가능

제품설명

cell handling이 짧은 간편한 workflow, Mix-Drop-Spin

그림 1. Lenti-X™ Transduction Sponge workflow
1. 타겟 세포와 lentivirus를 혼합 (총 부피 최대 150 ㎕).
2. 스펀지를 24well plate로 well당 1개씩 옮기고 1번의 mixture를 스펀지 위로 dropwise 방식으로 첨가 및 흡수.
3. 37 ℃의 CO₂ 인큐베이터에서 1시간동안 incubation 후 well에 배지를 추가로 1 ㎖ 첨가, 이후 인큐베이터에서 16~24시간 배양.
4. 다음날 배지와 스펀지를 모두 15 ㎖ 튜브로 옮기고 Release Buffer 1 ㎖를 첨가 후 원심분리하여 스펀지를 용해, 용해 후 방출된 세포를 PBS로 2회 wash.
5. Transduction된 세포를 새 culture vessel로 이동 후 배양.


그림 2. Lenti-X™ Transduction Sponge외관 및 사용법
A: 제품 사진 (개별 포장된 스펀지 24개)
B: 다공성 스펀지의 확대사진 (150배), 20~300 ㎛의 microfluidics 구조
C: 핀셋으로 스펀지를 24 well plate로 옮기는 과정
D: 스펀지에 세포와 바이러스 mixture를 첨가한 뒤 1시간 동안 incubation하는 과정
패널 E: Transduction (16~24시간 incubation)후 스펀지를 15 ㎖ 튜브로 옮기는 과정

실험 데이터

그림 3. Lenti-X™ Transduction Sponge은 다양한 cell에서 spinoculation (with polybrene)과 동등하거나 더 효과적인 transduction이 가능.
A: 1 X 10⁶ Jurkat 세포에 spinoculation과 Lenti-X™ Transduction Sponge 방법으로 ZsGreen1을 발현하는 lentivirus를 MOI 0, 1, 5, 10로 transduction한 결과이다. Spinoculation은 cell plate를 Polybrene 8 ㎍/㎖과 함께 32℃에서 1,400 x g로 90분간 원심분리하였고, Lenti-X™ Transduction Sponge는 제품의 사용자메뉴얼에 따라 진행하였다. 두 방법 모두 transduction 48시간 뒤 ZsGreen1의 발현율을 FCM (Flow Cytometry)으로 분석하여 정리하였다. 그 결과 Lenti-X™ Transduction Sponge가 spinoculation 방법보다 간편하고 더욱 효과적이었다.
B: ZsGreen1 발현 lentivirus를 패널 A와 동일한 방법으로 다양한 cell line에서 transduction한 결과이다. 다양한 세포에서 Lenti-X™ Transduction Sponge는 spinoculation 방법과 동등하거나 더 효과적이었다.


그림 4. Lenti-X™ Transduction Sponge는 primary T cell의 viability를 유지하면서 transduction 효율을 높일 수 있다.
A. Human primary T cell을 MHC tetramer, antiCD3/CD28-coated bead, RetroNectin+CD3, CD3를 각각 사용하여 활성화시켰고, 48시간 뒤 CD69+의 발현을 측정하여 활성화 정도를 측정하였다. 이후 1 x 10⁶ 개의 활성화된 세포에 Lenti-X™ Transduction Sponge를 사용해 24시간 동안 ZsGreen1을 발현하는 lentivirus로 transduction하고, transduction 48시간 후 FACS로 ZsGreen1의 발현율을 측정하여 %로 정리한 결과이다.
B. Transduction 48시간 후 7-AAD 염색과 FACS를 사용해 viability를 측정한 결과, 높은 viability를 확인할 수 있었다.

보존: 4℃ (Lenti-X™ Transduction Sponges는 건조제와 함께 파우치 보관)

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