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Overview
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His-tag 융합 단백질 정제
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단백질 추출 · 정제관련
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항체 정제
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곤충 세포 단백질 발현 (Bac..
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포유류 세포 단백질 발현
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대장균 단백질 발현
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Brevibacillus／Bacillus 발..
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단백질 검출, 정량, 해석
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Protease (아미노산 서열 해..
- 중성 pH 상태에서 단백질 정제
- Native 혹은 denaturation 상태에서 사용
- 더 높은 단백질 용해도
- TALON IMAC resin을 이용한 정제에 최적
제품설명
HAT Protein Expression and Purification System (특허 출원 중)을 이용하면, 단백질 발현과 정제를 보다 쉽고 효율적으로 진행할 수 있다. E.coli에 HAT vector가 도입되면,
HAT tag를 포함한 목적 단백질을 생산할 수 있고, 생산된 목적 단백질은 생체와 동일한 중성 pH 상태에서 정제한다. HAT (histidine affinity tag) tag는 천연 polyhistidine peptide로,
inclusion body를 형성하지 않는 것이 장점이다. 또한, HAT tag는 6 x His보다 길이가 길어, 목적 단백질이 고분자인 경우 고분자단백질 구조 바깥쪽에 위치하게 된다. 따라서,
Tag가 단백질 구조 내부에 위치할 경우에 비해 histidine이 정제 resin과 더 쉽게 결합하여, 목적 단백질의 정제가 용이하다. 시스템 내 포함되어 있는 TALON resin을 이용하면,
변성 및 비변성 조건 모두에서 목적 단백질을 쉽게 정제할 수 있다.
그림 1. TALON Superflow을 이용한 HAT-Tag 융합 단백질의 FPLC 정제
E. coli 는 50 mM sodium phosphate, 0.3 M sodium chloride, 5 mM imidazole을 포함하는 시약 (pH 7.0) 으로 추출하여, 150 mM imidazole 용액으로 단백질을 회수하였다.
(A) 세포 용해 후, TALON Superflow column으로 단백질 정제
(B) SDS-PAGE를 이용한 정제 확인 (M: Molecular weight marker)
표 1. Polyhistidine tag sequence
| tag |
Amino acid sequence |
6 x His |
His -His -His -His -His -His |
6 x HN |
His -Asn -His -Asn -His -Asn -His -Asn -His -Asn -His -Asn |
HAT |
Lys -Asp -His -Leu -lle -His -Asn -Val -His -Lys -Glu -Glu -His -Ala -His -Asn -Lys |
표 2. HAT Protein Expression & Purification System (Code 631205)의 특징과 장점
| 특징 |
장점 |
긴 길이의 tag |
고분자 단백질에 최적 |
Tag 내 균등한 전하 분포 |
높은 수용성 |
천연 유래의 tag sequence |
낮은 세포 독성 |
생체와 동일한 pH에서 정제 |
목적 단백질 구조 유지 |
그림 2. pHAT 10/11/12의 vector map
HAT system는 목적 단백질 서열을 cloning할 수 있는 세 종류의 vector (pHAT10/11/12)가 포함되어 있으며, 각각 동일한 구조로 MCS에 서로 다른 reading frame을 가진다.
또한 vector 내 정제된 단백질에서 HAT sequence를 제거할 수 있는 enterokinase (EK) cleavage site를 포함한다. 제한효소를 이용하면 EK site를 포함한 HAT sequence 혹은 단독으로 다른 vector에 cloning할 수 있다.
구성품 및 보존 (자세한 내용은 CoA를 참조 바랍니다)
Keyword : 단백질 발현,단백질 정제,Ecoli,대장균 발현,IMAC,metal affinity,HAT,histidine affinity tag,His-tag
