제품설명

E. coli는 사용이 편리하고 범용적인 expression system으로 단백질 발현을 위해 일반적으로 사용된다. 하지만, 외래 단백질을 발현하는 경우 단백질의 잘못된 folding으로 인해 inclusion body가 형성되거나 protease에 의해 분해되는 등의 다양한 문제가 종종 발생하곤 한다.

본 제품은 Chaperone Plasmid Set (Code 3340)에 포함되어 있는 5종류의 chaperone plasmid를 각각 형질 전환한 E. coli BL21주의 competent cell이다. 이 세포는 단백질의 folding에 관여한다고 알려져 있는 여러 가지 분자의 chaperone이 chaperone team으로 효율적으로 발현하도록 설계되어 있다. 이러한 chaperone team과 목적 단백질을 co-expression 시키는 것으로 발현 단백질의 회수율이 증가되어 일반적인 방법으로는 inclusion body가 형성되어 회수가 불가능했던 단백질까지 회수할 수 있다. 일반적으로 Chaperone plasmid를 이용하여 목적 단백질과 chaperone team을 co-expression 하려면, 먼저 chaperone plasmid로 숙주 E. coli를 형질 전환하여 형질 전환체로 competent cell을 제작한 후, 목적 단백질을 발현하는 plasmid를 형질 전환시켜야 한다. 하지만 본 제품은 Chaperone plasmid 로 형질 전환한 BL21주로부터 조제한 competent cell이므로 한 번의 형질 전환으로 간단하게 목적 단백질과 chaperone team이 co-expression된 E. coli를 얻을 수 있다.

또한 Cold shock expression vector pCold DNA 시리즈 (Code 3360외)와 함께 사용하면 높은 효과를 얻을 수 있다.

주) chaperone plasmid를 포함하지 않아 control용으로 사용할 수 있는 TaKaRa Competent Cell BL21(Code 9126)를 별도로 판매하고 있다.
주) 본 제품의 숙주인 BL21주는 T7 RNA Polymerase를 발현하지 않아, pET 시스템 등 T7 promoter를 이용한 발현 시스템에는 사용할 수 없다.
주) 본 제품은 Electroporation에는 사용할 수 없다.

내용

Chaperone Competent Cells BL21 Set (Code 9120)

Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21	3 x 100 ㎕
Chaperone Competent Cells pGro7/BL21	3 x 100 ㎕
Chaperone Competent Cells pKJE7/BL21	3 x 100 ㎕
Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21	3 x 100 ㎕
Chaperone Competent Cells pTf16/BL21	3 x 100 ㎕
TaKaRa Competent Cells BL21	3 x 100 ㎕
pUC19 DNA (0.1 ng/㎕)	1 x10 ㎕
3. SOC Medium*	18 x 1 ㎖

Chaperone Competent Cell (Code 9121~9126)

TaKaRa Competent Cells BL21*	10 x 100 ㎕
pUC19 DNA (0.1 ng/㎕)	3 x 100 ㎕
SOC Medium**	1 x 10 ㎖

* pKJE7를 형질전환한 E. coli BL21 단독 제품은 종매 되었습니다.
** SOC Medium의 조성

2 %		Tryptone
0.5 %		Yeast extract
10 mM		NaCl
2.5 mM		KCl
10 mM		MgSO4
10 mM		MgCl2
20 mM		Glucose

[주의]
SOC Medium을 녹였을 때 드물게 침전이 생길 수 있으나 품질에는 문제가 없다.
침전이 생긴 경우 실온에서 섞거나 37℃에서 몇 분간 데워서 침전을 녹여서 사용한다.

보존

-80 ℃

Chaperone plasmid map

No.	Plasmid	Chaperone	Promoter	Inducer	Resistant Marker	Sequence
1	pG-KJE8	dnaK-dnaJ-grpE, groES-groEL	araB,Pzt-1	L-Arabinose Tetracyclin	Cm	link
2	pGro7	groES-groEL	araB	L-Arabinose	Cm	link
3	pKJE7	dnaK-dnaJ-grpE	araB	L-Arabinose	Cm	link
4	pG-Tf2	groES-groEL-tig	Pzt-1	Tetracyclin	Cm	link
5	pTf16	tig	araB	L-Arabinose	Cm	link

<함께 사용할 수 있는 expression plasmid>
본 제품에 포함된 Chaperone plasmid는 pACYC의 복제 기점 및 chrolamphenicol 내성 유전자 (Cmr 유전자)을 포함하고 있어 가장 널리 사용되는 ColE1 타입의 ampicillin 내성 유전자를 포함한 발현용 plasmid를 사용할 수 있다. 각 Chaperone 유전자는 araB 또는 Pzt-1 (tet) promoter 하류에 배치되어 있어, 목적 유전자를 lac 등 다른 promoter 하류에 두면 목적단백질과 chaperone 단백질을 따로 발현시킬 수 있고, 각 promoter에 필요한 컴포넌트 (araC 또는 tetR)는 plasmid 상에 배치되어 있다.
단, chrolamphenicol 내성 유전자를 포함한 발현 plasmid 와는 함께 사용할 수 없다.
본 제품은 특히 Cold shock expression vector인 pCold™ DNA 시리즈 (Code 3360-3364), pCold™ TF DNA (Code 3365), pCold™ ProS2 DNA (Code 3371), pCold™ GST DNA (Code 3372)와 같이 사용하면 목적 단백질을 높은 효율로 발현시킬 수 있다.

Genotype

E.coli BL21：F-, ompT, hsdS_B (r_B^- m_B^-), gal, dcm

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