Á¦Ç°¼³¸í
¾÷±×·¹À̵åµÈ TaqÀÌ Æ÷ÇÔµÈ Low DNA ŸÀÔ
TaKaRa Taq¢â HS Low DNA
- ¼÷ÁÖÀ¯·¡ (E. coli) DNAÀÇ È¥ÀÔÀ» ±Øµµ·Î ¾ïÁ¦ÇÑ PCR premix
- Àú º¹Á¦ À¯ÀüÀÚÀÇ °í°¨µµ PCR ÁõÆø ¹× ¹é±×¶ó¿îµå°¡ Çؼ®¿¡ Å« ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ¡´Â ¿¬±¸¿¡ ÃÖÀû
¹Ì»ý¹°ÀÇ °í°¨µµ °ËÃâ, 16S ¹Ì»ý¹°»ó (±ÕÃÑ) ºÐ¼®, no template control¿¡¼ÀÇ ÁõÆø µî
- dNTP¿Í Mg2+À» Æ÷ÇÔÇÑ 2 x premix ½Ã¾à
TaKaRa Taq¢â HS Low DNA ´Â ´ÙÄ«¶óÀÇ Á¤Á¦ ±â¼ú°ú DNA ºÒÈ°¼ºÈ 󸮿¡ ÀÇÇØ PCRÀÇ ÁÖÇüÀÌ µÉ ¼ö ÀÖ´Â ¼÷ÁÖ ´ëÀå±Õ À¯·¡ÀÇ DNA³ª ±âŸ Á¦Á¶ °øÁ¤¿¡¼
ÅõÀÔÇÑ ¿ø·á À¯·¡ÀÇ DNA¸¦ ±ØÇÑÀ¸·Î ¾ïÁ¦ÇÑ premix PCR ½Ã¾àÀÌ´Ù. ½ÅÀå ¼Óµµ¿Í ƯÀ̼ºÀ» ³ôÀÎ °³·®Çü Taq DNA polymerase¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© °í°¨µµ·Î ƯÀÌÀûÀÎ
PCRÀ» ½Å¼ÓÈ÷ ÁøÇàÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
º» È¿¼Ò´Â anti-Taq antibody¸¦ Æ÷ÇÔÇÑ hot-start PCR È¿¼Ò·Î °í¿Â °¡¿ÇÒ ¶§±îÁö´Â anti-Taq antibody°¡ È¿¼Ò¿¡ °áÇÕÇØ polymerase È°¼ºÀ»
¾ïÁ¦Çϱ⠶§¹®¿¡, PCR cycle ÀüÀÇ mis-primmingÀ̳ª primer dimer¿¡¼ À¯·¡ÇÏ´Â ºñƯÀÌÀû ÁõÆøÀ» ¸·À» ¼ö ÀÖ´Ù. Anti-Taq antibody´Â PCR initial denaturation
°úÁ¤¿¡¼ º¯¼ºµÇ¾î ºÐ¸®µÇ¹Ç·Î, È¿¼Ò È°¼ºÈ¸¦ À§ÇÑ º°µµÀÇ °úÁ¤À» Ãß°¡ÇÒ ÇÊ¿ä°¡ ¾ø´Ù.
Premix ŸÀÔÀ¸·Î »ó¿Â¿¡¼ÀÇ ½Å¼ÓÇÑ ¹ÝÀÀ¾× Á¶Á¦°¡ °¡´ÉÇϸç, Æ÷ÇÔµÈ È¿¼Ò´Â 5'¡æ 3'exonuclease È°¼º°ú 3'¡æ 5'exonuclease È°¼ºÀ» °®Áö ¾Ê´Â´Ù.
³»¿ë (20 §¡ ¹ÝÀÀ °è, 100ȸ)
1. TaKaRa Taq¢â HS Low DNA (2x) |
200 §¡ x 5 |
2. dH2O for Low DNA |
200 §¡ x 5 |
º¸Á¸
-20 ¡É
±â¿ø
Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the Thermus aquaticus DNA polymerase gene
ÀϹÝÀû PCR ¹ÝÀÀ Á¶¼º(Total 20 §¡ ¹ÝÀÀ °è)
TaKaRa Taq HS Low DNA |
10 §¡ |
Template |
< 100 ng |
Primer 1 |
0.2 ¥ìM* (final conc.) |
Primer 2 |
0.2 ¥ìM* (final conc.) |
dH2O for Low DNA |
Up to 20 §¡ |
ÁÖ) ¹ÝÀÀ¾×ÀÇ ½Ç¿Â Á¶Á¦µµ °¡´ÉÇÏÁö¸¸, ½Ã¾àÀº ¹Ýµå½Ã ¾óÀ½ À§¿¡ µÎ°í »ç¿ëÇÑ´Ù.
*: Ramp temperature speed°¡ 5¡É ÀÌ»óÀÇ °í¼Ó thermal cycler¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ´Â °æ¿ì, Primer ³óµµ¸¦ 0.6 ¥ìMÀ¸·Î ¼³Á¤ÇÑ´Ù.
ÁÖÀÇ
º» Á¦Ç°Àº ±âÁ¸ ÀϹÝÀûÀÎ PCR È¿¼Ò¿¡ ºñÇØ ¸Å¿ì ÀûÀº template·®ÀÇ ÁõÆø¿¡ ´ëÀÀÇÏ´Â PCR È¿¼Ò·Î ¹Ì»ý¹° °ËÃâÀ» ¸ñÀûÀ¸·Î ÇÏ´Â °æ¿ì, ¹ÝÀÀ ÀåÄ¡¿¡ È¥ÀÔµÈ
¹Ì·®ÀÇ È¯°æ ¼¼±ÕÀÇ DNA¸¦ ÁÖÇüÀ¸·Î ÁõÆøÇÏ´Â °æ¿ì°¡ ÀÖ½À´Ï´Ù. ±×·¯ÇÑ °æ¿ì, PCR cycles ¼ö¸¦ ÁÙÀÌ°í primer ¼³°è¸¦ º¯°æÇÒ °ÍÀ» ÃßõÇÕ´Ï´Ù.
½ÇÇè ¿¹
1. ¹Ì·® »ùÇÃÀ» ÁÖÇüÀ¸·Î ÇÑ Å¸»ç µ¿ÀÏ Å¸ÀÔ Á¦Ç°°úÀÇ ¼º´Éºñ±³
TaKaRa Taq¢â HS Low DNA´Â no template control¿¡¼µµ ¹é±×¶ó¿îµå¸¦ Àß ¾ïÁ¦Çϸé¼, ¹Ì·®ÀÇ »ùÇÿ¡¼ Ÿ»ç Á¦Ç°º¸´Ù ªÀº ½Ã°£¿¡ °í°¨µµ·Î °ËÃâ °¡´ÉÇÏ´Ù.
ÁÖÇü: |
E. coli genomic DNA |
1: |
100 cells ÇØ´ç |
3: |
102 cells ÇØ´ç |
Ÿ°Ù: |
16S rDNA (348 bp) |
2: |
101 cells ÇØ´ç |
4: |
103 cells ÇØ´ç |
|
|
M: |
100 bp DNA Laddar |
°ü·ÃÁ¦Ç°
- ¹ü¿ëÀûÀÎ ¿Ã¶ó¿î´õ agarose: SeaKem LE Agarose
- 5ºÐ¸¸¿¡ Àü±â¿µµ¿ ¿Ï·á! Precast gel system: FlashGel¢â System
- ÄÄÆÑÆ®ÇÑ 96 well gradient PCR ±â±â: Clontech PCR Thermal Cycler GP