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GC-rich Template에 강한 High Fidelity PCR 효소

HS with GC Buffer

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
R044A
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
250 U
250,000원  R044A.e_v1908Da.pdf
Takara
R044B
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
1,000 U
(250 U x 4)
800,000원 

제품설명
PrimeSTAR HS DNA Polymerase는, 다카라바이오가 독자적으로 개발한 지극히 높은 정확성과 뛰어난 증폭 효율을 겸비하는 DNA polymerase이다. 본 효소는 매우 강력한 3' - 5' exonuclease 활성을 가져, PCR 증폭에 대해 강력한 Proofreading 기능을 나타내는 한편, Taq DNA Polymerase의 매우 뛰어난 증폭 효율도 나타낸다. 상온에서의 DNA Polymerase 활성 및 3' - 5' exonuclease 활성을 억제하는 monoclonal Ab를 첨가하고 있기 때문에, PCR 반응전의 miss-priming이나 primer의 digestion을 막을 수 있어 높은 반응 특이성을 얻을 수 있다.또, 본 효소는 높은 priming 효율을 가지고 있기 때문에, annealing 시간을 짧게 설정할 수 있어 종래의 반응 시간을 단축할 수 있다. 게다가 고도로 지적화한 PrimeSTAR Buffer를 이용하는 것으로, 폭넓은 타겟에 대해 High Fidelity, 고감도, 고특이성, 높은 성공율로 증폭이 되었다.
특징
GC rich인 Thermus thermophilus HB8 genomic DNA를 주형으로서 임의에 선택한 8 영역(증폭 사이즈는 각각 약 500 bp)을 PCR 증폭 후, 벡터에 클로닝 해, 각 배열에 대해 복수 클론을 픽업 해 그 순서를 확인해, mutation frequency를 얻었다.
그 결과, PrimeSTAR HS DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase와 비교해서 10배 Fidelity가 높고, A사 High Fidelity 효소에 비해도 동등 이상의 정확성을 나타냈다.
이 방법은, 실제의 PCR에 가장 정확하게 Fidelity의 구하는 방법이며, 정확성이 중요한 반응에 안심하고 본효소를 사용할 수 있다.
내용(250U)
PrimeSTAR HS DNA Polymerase with GC buffer (TaKaRa Code R044A/B)
PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5 U/ul) 100 ul
2 x PrimeSTAR GC Buffer(Mg2+Plus) 1.7 ml x 3
dNTP Mixture(2.5 mM) 800 ul
* Mg2+ 농도:5 mM (5×)
형태
50 mM Tris-HCl(pH8.2 at 4℃)
2100 mM NaCI
0.1 mM EDTA
1 mM DTT
0.1 % Tween 20
0.1 % Nonidet P-40
50 % Glycerol
활성의 정의
활성화 salmon sperm DNA를 Template/primer로 이용해 아래와 같은 활성 측정용 반응액 중에서 74℃에서 30분간 10 nmol의 nucleotides를 acid insolubility sediment로 전환시키는 활성을 1 U로 한다.
활성 측정용 반응액 조성
100 mM Tris-HCl 완충액 pH8.3 at 37℃
10 mM KCl
6 mM (NH4)2SO4
2 mM MgCl
0.1 % Triton X-100
0.001% BSA
각 200 μM dATP·dGTP·dCTP
100 μM [3H]TTP
0.4 mg/mll 활성화 salmon sperm DNA
PCR 산물
PrimeSTAR HS DNA polymerase를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 blunt end다. 따라서, 그 PCR 산물을 그대로(필요에 따라서 인산화해) blunt end의 vector에 클로닝 하는 것이 가능하다. T-vector에 cloning 할 수 없다.
※ blunt end vector에 cloning시엔 TaKaRa Mighty Cloning Kit (Blunt end) (Code 6026)를 이용하십시오.
PCR 검정
- λDNA를 주형으로 한 PCR(증폭 산물 8, 10, 12, 15 kbp)에 대해 양호한 증폭을 볼 수 있는 것을 확인하고 있다.
- Human genome DNA를 주형으로 한 PCR(증폭 산물 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 kbp)에 대해 양호한 증폭을 볼 수 있는 것을 확인하고 있다
보존 -20℃
순도
- 10 U의 본 효소와 0.6 μg의 λ-Hind III 분해물을 74℃, 1시간 반응시켜도 DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.
- 10 U의 본 효소와 0.6 μg의 supercoiled pBR322 DNA를 74℃, 1시간 반응시켜도 DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.






Keyword : GC rich
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