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Premix Type의 High Fidelity PCR 효소

HS (Premix)

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
R040A
PrimeSTAR® HS (Premix)
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
100 회
(50 μl 반응 시)
190,000원  R040A_DS.v1403Da.pdf, R040A_e.v1108Da.pdf
Takara
R040B
PrimeSTAR® HS (Premix)
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
400 회
608,000원 

제품설명
본 제품은 다카라가 독자적으로 개발한 High-Fidelity PCR 효소인 PrimeSTAR HS DNA Polymerase와 반응용 buffer,dNTP Mixture를 2 배 농도로 혼합한 Premix PCR 효소이다. 반응액 조제가 간편하고 contamination 위험도 낮으므로 high throughput 실험계에 유용하다.
본 제품에 사용되고 있는 PrimeSTAR HS DNA Polymerase는 매우 강력한 3' → 5' exonuclease 활성을 가져, PCR 증폭에 대해 강력한 Proofreading 기능을 나타내는 한편, Taq DNA Polymerase의 매우 뛰어난 증폭 효율도 나타낸다.
상온에서의 DNA Polymerase 활성 및 3' → 5' exonuclease 활성을 억제하는 monoclonal Ab를 첨가하고 있기 때문에, PCR 반응전의 miss-priming이나 primer의 digestion을 막을 수 있다. 또한 본 효소는 높은 priming 효율을 가지고 있기 때문에, annealing 시간을 짧게 설정할 수 있어 종래의 반응 시간을 단축할 수 있다. 게다가 고도로 지적화한 PrimeSTAR Buffer를 이용하는 것으로, 폭넓은 타겟에 대해 High Fidelity, 고감도, 고특이성, 높은 성공율로 증폭이 되었다.
내용물(100회 반응분)
PrimeSTAR HS (Premix ) : 500 μl×5
조성 :
PrimeSTAR HS DNA Polymerase 1.25 U/25 μl
dNTP Mixture 2 ×conc.;각 0.4 mM
PrimeSTAR Buffer 2 ×conc.;Mg2+ = 2 mM
보존 -20℃
※ 동결 융해의 반복에 의해 활성이 현저하게 떨어질 수 있다. 융해 후에는 PCR용 tube에 분주하여-20 ℃보존해 주시기 바랍니다(50 μl 반응의 경우, 25 μl 두개로).
일반적인 PCR 반응 조성(Total 50 μl)
사용량 최종 농도
PrimeSTAR HS (Premix) 25 μl 1 ×
Primer 1 10 ~15 pmol 0.2 ~0.3 μM
Primer 2 10 ~15 pmol 0.2 ~0.3 μM
Template <200 ng
dH2O up to 50 μl
PCR 조건
(A ) 3 step PCR 의 경우
98 ℃ 10 sec.
55 ℃ 5 sec. 또는15 sec. ┃ 30 cycles
72 ℃ 1 min. /kb

(B ) 2 step PCR 의 경우
98 ℃ 10 sec. ] 30 cycles
68 ℃ 1 min. /kb

본 효소의 경우 일반적으로 3 step PCR 반응을 권장합니다.

- Denature 조건 98 ℃
5 ~10 sec.를 권장한다. 94 ℃는 10~15 sec.로 설정하시기 바랍니다.
- Annealing 온도
우선 55 ℃에서 test 해보시기 바랍니다.
- Annealing 시간
Tm 값(아래 참고)이 55 ℃ 이상의 경우 → 5 sec.로 설정
Tm 값(아래 참고)이 55 ℃ 미만의 경우 → 15 sec.로 설정

※ Tm 값 계산방법
Tm 값(℃)=2 (NA +NT )+4 (NC +NG )-5
Primer의 길이가 25 mer 이하의 경우에 적용하시기 바랍니다. 25 mer가 넘는 경우는 annealing 시간을 5 sec.로 설정.

<중요> 본 효소는 priming 효율이 매우 높은 효소이므로, annealing 시간은5 sec. 또는 15 sec.로 설정하고 반응하시기 바랍니다. Annealing 시간이 길어지면 smearing 현상이 생기는 경우가 있습니다.

3 step에서 smearing 현상이 발생하는 경우, 또는 Tm 값이 70 ℃ 이상인 primer를 사용하는 경우에는 2 step의 반응을 권장합니다.

Keyword :
-
High fidelity PCR: PrimeSTAR
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