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GC-rich Template에 강한 High Fidelity PCR 효소

HS with GC Buffer

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	R044A	PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer	250 U	211,200원 ~~264,000원~~	02.26 ~ 04.19
Takara	R044B	PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer	1,000 U (R044A x 4)	848,000원

Product index

Overview
High fidelity PCR: PrimeST..
Standard PCR: Ex, LA, rTaq..
Direct PCR: MightyAmp
Dye가 포함된 premix
특수 PCR (Epigenetics, UNG..
PCR Enzyme (Clontech)
DNA PCR 관련 제품
RT-PCR 관련 제품
Mutagenesis
- Diversify PCR Random M..
PCR Subtraction 관련 제품
PCR 장치
PCR Accessory Products
- Advantage Ultrapure PC..
- TaqStart Antibody
Whole Genome SNP Detection
- TITANIUM DNA AMPLIFICA..

제품설명

PrimeSTAR HS DNA Polymerase는, 다카라바이오가 독자적으로 개발한 지극히 높은 정확성과 뛰어난 증폭 효율을 겸비하는 DNA polymerase이다. 본 효소는 매우 강력한 3' - 5' exonuclease 활성을 가져, PCR 증폭에 대해 강력한 Proofreading 기능을 나타내는 한편, Taq DNA Polymerase의 매우 뛰어난 증폭 효율도 나타낸다. 상온에서의 DNA Polymerase 활성 및 3' - 5' exonuclease 활성을 억제하는 monoclonal Ab를 첨가하고 있기 때문에, PCR 반응전의 miss-priming이나 primer의 digestion을 막을 수 있어 높은 반응 특이성을 얻을 수 있다.또, 본 효소는 높은 priming 효율을 가지고 있기 때문에, annealing 시간을 짧게 설정할 수 있어 종래의 반응 시간을 단축할 수 있다. 게다가 고도로 지적화한 PrimeSTAR Buffer를 이용하는 것으로, 폭넓은 타겟에 대해 High Fidelity, 고감도, 고특이성, 높은 성공율로 증폭이 되었다.

특징

GC rich인 Thermus thermophilus HB8 genomic DNA를 주형으로서 임의에 선택한 8 영역(증폭 사이즈는 각각 약 500 bp)을 PCR 증폭 후, 벡터에 클로닝 해, 각 배열에 대해 복수 클론을 픽업 해 그 순서를 확인해, mutation frequency를 얻었다.
그 결과, PrimeSTAR HS DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase와 비교해서 10배 Fidelity가 높고, A사 High Fidelity 효소에 비해도 동등 이상의 정확성을 나타냈다.
이 방법은, 실제의 PCR에 가장 정확하게 Fidelity의 구하는 방법이며, 정확성이 중요한 반응에 안심하고 본효소를 사용할 수 있다.

내용(250U)

PrimeSTAR HS DNA Polymerase with GC buffer (TaKaRa Code R044A/B)
PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5 U/ul)	100 ul
2 x PrimeSTAR GC Buffer(Mg²⁺Plus)	1.7 ml x 3
dNTP Mixture(2.5 mM)	800 ul
* Mg²⁺	농도:5 mM (5×)

형태

50 mM	Tris-HCl(pH8.2 at 4℃)
100 mM	NaCI
0.1 mM	EDTA
1 mM	DTT
0.1 %	Tween 20
0.1 %	Nonidet P-40
50 %	Glycerol

활성의 정의

활성화 salmon sperm DNA를 Template/primer로 이용해 아래와 같은 활성 측정용 반응액 중에서 74℃에서 30분간 10 nmol의 nucleotides를 acid insolubility sediment로 전환시키는 활성을 1 U로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

100 mM	Tris-HCl 완충액 pH8.3 at 37℃
10 mM	KCl
6 mM	(NH₄)₂SO₄
2 mM	MgCl
0.1 %	Triton X-100
0.001％	BSA
각 200 μM	dATP·dGTP·dCTP
100 μM	[³H］TTP
0.4 mg/mll	활성화 salmon sperm DNA

PCR 산물

PrimeSTAR^® HS DNA Polymerase를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 평활 말단 (Blunt End)이다.
따라서 T-vector에 클로닝 하는 경우, PCR 산물의 3' 말단에 dA를 부가해야 하며, Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR^®(Code 6019)를 이용하여 A-tailing 및 TA cloning을 진행할 수 있다.
PCR 산물을 그대로 (필요에 따라서 인산화하여) 평활 말단 벡터에 클로닝하는 경우 Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)를 이용할 수 있다.

PCR 검정

- λDNA를 주형으로 한 PCR(증폭 산물 8, 10, 12, 15 kbp)에 대해 양호한 증폭을 볼 수 있는 것을 확인하고 있다.
- Human genome DNA를 주형으로 한 PCR(증폭 산물 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 kbp)에 대해 양호한 증폭을 볼 수 있는 것을 확인하고 있다

보존 -20℃

순도

- 10 U의 본 효소와 0.6 μg의 λ-Hind III 분해물을 74℃, 1시간 반응시켜도 DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.
- 10 U의 본 효소와 0.6 μg의 supercoiled pBR322 DNA를 74℃, 1시간 반응시켜도 DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.