Á¦Ç° ¼³¸í
º» Á¦Ç°Àº PCR¿ë DNA polymerase, PCR¿ë ¹ÝÀÀ buffer, dNTP Mixture°¡ È¥ÇյǾî 0.2 §¢ PCR tube¿¡ 25 §¡¾¿ ºÐÁֵǾî ÀÖ´Â 2x premix ½Ã¾àÀÌ´Ù.
½Ã¾àÀÌ ÀÌ¹Ì ºÐÁֵǾî Àֱ⠶§¹®¿¡ template¿Í primer¸¦ ÷°¡ÇÏ´Â °Í¸¸À¸·Î PCR¹ÝÀÀÀ» ½ÃÀÛÇÒ ¼ö ÀÖ°í, loading dye°¡ Æ÷ÇԵǾî ÀÖ¾î PCR ¹ÝÀÀ ÈÄ ¹Ù·Î agarose gel¿¡ Àü±â¿µµ¿ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
º¸Á¸ -20 ¡É
Á¶¼º
TaKaRa Ex Taq |
1.25 U/25 §¡ |
dNTP Mixture |
2¡¿conc.; °¢ 0.4 mM |
Ex Taqbuffer |
2¡¿conc.; 4 mM Mg2+Æ÷ÇÔ |
»ö¼Ò ¸¶Ä¿ |
Orange G/Bromophenol Blue |
ºñÁß Áõ°¡Á¦ |
* PCR ÁõÆø ÈÄ ÁõÆø»ê¹°À» ¹Ù·Î Àü±â¿µµ¿ ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
PCR»ê¹°ÀÇ Àü±â ¿µµ¿ ½Ã¿¡´Â TAE bufferÀÇ »ç¿ëÀ» ±ÇÀåÇϸç, TBE buffer ÀÌ¿ë ½Ã »ùÇÃÀÌ well¿¡ Àß loadingµÇÁö ¾ÊÀ» ¼öµµ ÀÖ½À´Ï´Ù.
ÁõÆø »ê¹°ÀÇ ¸»´Ü
º» Á¦Ç°À» ÀÌ¿ëÇØ ÁõÆøÇÑ PCR »ê¹°ÀÇ ´ëºÎºÐÀº 3£§¸»´Ü¿¡ A°¡ 1 ¿°±â ºÎ°¡µÇ¾î ÀÖ´Ù. µû¶ó¼ PCR »ê¹°À» Á÷Á¢ T-Vector (pMD20 (Code 3270), pMD19 (Simple) (Code 3271) µî) ¶Ç´Â Mighty TA-cloning Kit (Code 6028)À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© cloningÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
¶Ç, Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)·Î ÆòÈ° ¸»´ÜÈ ¹× Àλêȸ¦ 󸮸¦ ÇÏ¿©, ÆòÈ° ¸»´Ü vector¿¡µµ cloningÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
°ü·ÃÁ¦Ç°
- ¹ü¿ëÀûÀÎ ¿Ã¶ó¿î´õ agarose: SeaKem LE Agarose
- 5ºÐ¸¸¿¡ Àü±â¿µµ¿ ¿Ï·á! Precast gel system: FlashGel¢â System
- ÄÄÆÑÆ®ÇÑ 96 well gradient PCR ±â±â: Clontech PCR Thermal Cycler GP