- 높은 displacement 활성과 증폭효율
- 30℃에서 long fragment DNA 주형을 정확하고 효율적으로 증폭할 수 있는 효소
제품설명
phi29 DNA Polymerase는 Bacillus subtilis phage phi29의 DNA polymerase이다. 본 제품은 30℃ 부근에서 활성을 가지며, 높은 displacement 활성으로 등온 증폭에 적합하고, 3'-5' exonuclease 활성에 의해 높은 정확도를 가지는 효소로, RCA (Rolling Circle Amplification)법이나 WGA (Whole Genome Amplification) 등에 사용할 수 있다.
증폭 반응에는 phi29 DNA Polymerase의 3'-5' exonuclease 활성에 의한 primer degradation을 방지하기 위하여 3' 말단이 보호 수식된 3' Phosphorothioate-modified Random Hexamer(Code 3807)의 사용을 권장한다.
실험예
1. 다양한 template DNA를 높은 감도로 증폭
M: λ Hind III Marker
NTC: 주형 DNA를 포함하지 않는 반응액
※0.7% agarose gel 사용, 각 반응액을 5 ㎕씩 loading
phi29 DNA Polymerase (Code RR340A)와 3' Phosphorothioate-modified Random Hexamer (Code 3807)를 사용하여 HL60 gDNA, M13 mp18 Single Strand DNA, pUC19 plasmid DNA를 주형으로 증폭 반응을 진행하였다. 각 DNA 주형은 반응액에 각각 5 ng, 0.5 ng, 50 pg, 5 pg씩 첨가하였고, 30℃에서 2시간 반응 후 전기영동 하였다.
그 결과, HL60 gDNA 및 M13 mp18 Single Strand DNA에서는 주형 DNA 5 pg~5 ng의 범위에서 증폭 가능하고, pUC19 plasmid DNA는 50 pg~5 ng의 범위에서 증폭 가능한 것을 확인하였다.
2. 반응 시간과 DNA 수율
phi29 DNA Polymerase와 3 'Phosphorothioate-modified Random Hexamer를 사용하여 pUC19 plasmid DNA를 주형으로 반응액 중에 0.5ng 첨가하고, 30℃에서 2, 4, 6, 8, 16시간 반응한 후 반응 당 DNA 수율을 측정하였다.
그 결과(N = 2), 2시간이면 충분한 수율이 합성됨을 확인하였고, 시간이 나질수록 합성량은 증가하는 것으로 나타났다(4~16시간).
3. 타사 제품 대비 높은 DNA 증폭 수율
(A)
M: λ Hind III Marker
NTC: 주형 DNA를 포함하지 않는 반응액
※0.7% agarose gel 사용, 각 반응액을 5 ㎕씩 loading
(B)
(A) 2시간의 반응 후, 전기영동으로 증폭된 DNA를 확인한 결과, phi29 DNA Polymerase (당사)는 타사의 효소에 비해 적은 주형량에서도 높은 DNA 수율이 얻어지고, 반응액에 주형을 포함하지 않는 NTC의 증폭은 확인되지 않았다. 반면, 타사 제품은 대부분 감도가 좋지 않았고, 일부 감도가 높은 효소는 NTC에서 DNA 증폭이 확인되었다.
(B) pUC19 DNA 0.5 ng을 주형으로 한 증폭 반응 2시간 후 및 4시간 후에, 반응액 20 ㎕당 DNA 수율을 측정한 결과, phi29 DNA Polymerase (당사)는 높은 DNA 수율을 얻을 수 있음을 확인하였다.
내용
phi29 DNA DNA polymerase (10 U/㎕) |
250 U |
10× phi29 DNA Polymerase Reaction Buffer |
250 ㎕ |
dNTP Mixture |
100 ㎕ |
보존 - 20 ℃
기원
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phi29 DNA Polymerase
Unit 정의
30℃에서 10분 동안 20 pmol의 dNTP를 산불용성 침전물에 도입하는 효소량을 1U로 한다.
불활성화 조건 65℃, 10 min
Application
- RCA (Rolling Circle Amplification)
- WGA (Whole Genome Amplification)
관련제품
- 고효율 핵산등온증폭용 PCR 효소: BcaBEST® DNA Polymerase ver.2.0
